一、 培養皿的準備
1．配備與待測樣品數相同的無(wú)菌培養皿，另上一個(gè)作對照組（每種培養劑一個(gè)對照組），在每個(gè)培養皿上標上待測樣品的記號
2．用燒過(guò)的鑷子將無(wú)菌吸收墊從包裝袋中取出，放入每個(gè)培養皿中，每取一個(gè)吸收墊，鑷子需用火燒一次
3．打開(kāi)培養皿蓋子到剛能加上約1.8ml的培養劑在吸收墊上，強烈建議使用裝有培養劑的小安瓿瓶、小瓶或小管，當處理大量樣品時(shí)，可使用無(wú)菌的吸管來(lái)分配培養劑
二、 培養劑的種類(lèi)：
總菌數 橙血清培養劑
酵母和霉菌數 橙血清培養劑
大腸桿菌數 MF-Endo培養劑
糞便大腸桿菌數 M-FC培養劑
4應有足夠的培養劑加入每個(gè)培養皿，使過(guò)濾膜能適當地粘附著(zhù)吸收墊。但過(guò)多的培養劑會(huì )引起菌落擴展重疊，常常得不到正確的計數結果。有需要時(shí)，建議調整推薦的培養劑數，以便粘附和菌落生長(cháng)。
三.過(guò)濾器支架的準備：
1. 打開(kāi)預先滅菌的過(guò)濾器支架或將過(guò)濾器座、漏斗和漏斗蓋在沸水中浸沒(méi)一分鐘作消毒。若沒(méi)有沸水，用95%酒精噴灑于漏斗和漏斗蓋，然后將其點(diǎn)燃，在火熄滅以后，讓過(guò)濾器冷卻至40℃以下，如果必須使用酒精，漏斗必須用耐火材料制造。
2. 用水煮過(guò)或火焰滅菌鉗子，將無(wú)菌過(guò)濾器的底座部分安裝于過(guò)濾燒瓶或真空管道上。
3. 用火燒過(guò)的鑷子放一張無(wú)菌薄膜在過(guò)濾器底座上，根據測試目的，使用特定的過(guò)濾膜：
總菌數/大腸桿菌數：0.45um薄膜
酵母菌和霉菌：0.80um薄膜
4. 用水煮過(guò)或火焰滅菌鉗子，將過(guò)濾器漏斗和漏斗蓋放置于底座上。如漏斗蓋帶有管口，則在管口處裝上過(guò)濾器，或予以封住。待過(guò)濾器的溫度低于40℃后才可加樣品。
5. 重復以上步驟，直到所有樣品都完成過(guò)濾。
四.樣品的過(guò)濾和平板培養
1. 無(wú)菌地將樣品直接倒入消毒和冷卻的過(guò)濾器漏斗中。蓋上過(guò)濾器漏斗的蓋子。若使用勺，須將勺放在95%的酒精的燒杯中。
2. 施加真空，使樣品通過(guò)薄膜。無(wú)菌地打開(kāi)裝有無(wú)菌水的玻璃瓶，先用火燒螺紋處，然后倒入約20毫升無(wú)菌水于過(guò)濾漏斗內，進(jìn)行沖洗。施加真空，使無(wú)菌水通過(guò)薄膜。在過(guò)濾完樣品或無(wú)菌水后，不要讓真空施加時(shí)間連續超過(guò)30秒以上。
3. 用火焰滅菌鉗子從過(guò)濾器底座上取下薄膜。輕微提起裝有吸收墊和培養劑的培養皿的蓋子，并放下薄膜，直到鑷子相對側的薄膜邊靠到吸收墊邊為止。將薄膜貼在吸收墊上滾動(dòng)，以排除氣泡。蓋上蓋子，在工作臺上輕輕拍打培養皿，以驅除薄膜下面的氣泡。
4. 作為對照組，用無(wú)菌水代替樣品重復上述過(guò)濾和平板培養程序。每一種培養劑須制備一個(gè)空白培養皿。
五.樣品培養
1.為了防止在過(guò)濾膜表面形成冷凝水，所有培養皿必須倒置于培養箱中。
2.在培養箱中放置一燒杯水，以維持適當的濕度。
3.在以下溫度下培養可以得到最好的結果：
總菌數 35℃
酵母菌和霉菌數 28℃
大腸桿菌數 35℃
注：只能使用一次性的培養皿，不能使用重復用的培養皿。
六.菌落數的計算
1. 總菌數
必須分別在培養24小時(shí)和72小時(shí)后計算菌數。點(diǎn)計所有菌落（不管類(lèi)型），并記錄最高數目。
2. 酵母菌和霉菌數
在培養48小時(shí)后，計點(diǎn)酵母菌和霉菌數，并在此后每隔24小時(shí)再計點(diǎn)一次，直到過(guò)第五天，記錄最高數目。
酵母菌通常為圓形的白色菌落。有時(shí)他們也帶有顏色。在一天至兩天后，一些酵母菌菌落的中心因吸收培養劑而變成藍色。
霉菌菌落會(huì )顯示不同顏色（包括白色、黃色、紅色、藍色和黑色），但從“絨毛狀”或“棉花狀”外觀(guān)很容易辨認這種菌落。通常霉菌菌落比細菌或酵母菌的菌落為大。
細菌菌落通常比酵母菌更快吸收指示劑，而其顏色會(huì )變成藍色、綠色、藍綠色或褐色。再這種培養劑中，細菌菌落比一般酵母菌小。
3.大腸桿菌數
大腸桿菌菌落呈綠色或墨綠色，并有明顯的金屬光澤。在培養24小時(shí)后，只計算有“金屬光澤”的菌落。
上一篇：空氣微生物測試
下一篇：耐熱霉菌測定方法
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
