沙門(mén)氏菌檢測（FDA與ISO對比）

沙門(mén)氏菌屬簡(jiǎn)介

1880年E. Berth首先發(fā)現傷寒沙門(mén)氏菌，1885年Salmon與Smith又分離出豬霍亂沙門(mén)氏菌，以后取Salmon氏之名為本菌屬之名。

沙門(mén)氏菌屬是一群符合腸桿菌科定義并與其血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性、需氧性、無(wú)芽孢桿菌。本菌屬種類(lèi)繁多，抗原結構復雜，現已發(fā)現2000多個(gè)血清型，我國已發(fā)現血清型近200個(gè)。

 

沙門(mén)氏菌屬——生物學(xué)特性

 

形態(tài)特征：

     革蘭氏陰性，大小為1~3×0.4~0.9μm的兩端鈍圓的短桿菌，無(wú)芽孢，一般無(wú)莢膜，除雞沙門(mén)氏菌和雛沙門(mén)氏菌以外，都有周身鞭毛，運動(dòng)力強。

 

培養特性：

沙門(mén)氏菌需氧或兼性厭氧，10-42 ℃都可生長(cháng)，最適生長(cháng)溫度為37℃，最適pH為6.8~7.8。

營(yíng)養瓊脂平板上：35~37℃培養18~24h，其菌落大小一般為2~3mm，光滑、濕潤、無(wú)色、半透明、邊緣整齊。

血平板上：中等大小的灰白色菌落。

沙門(mén)氏菌屬的抗原

菌體抗原（O抗原）

表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原

鞭毛抗原（H抗原）

纖毛抗原

 

FDA BAM沙門(mén)氏菌檢驗流程

1、  前增菌：25g樣+225mL乳糖肉湯 （肉制品、肉副產(chǎn)品、動(dòng)物產(chǎn)品），勻質(zhì)2min，室溫放置60 ±5min，混合均勻，測定調節PH6.8 ±0.2，在35℃下培養24 ± 2h。

2、  選擇性增菌：(1) 0.1ml+10mlMM（RV）在，42℃下培養24h。（水浴培養）

               (2)1ml+10mlTTB，①在43℃下培養24h（水浴培養）→含菌量低

                                 ②在35℃下培養24h→含菌量高

3、分離培養：選擇含菌量高的劃線(xiàn)接種，選擇性培養基（BS、XLD、HE）在35℃下培養24~48h（BS）

4、生化鑒定：（1）每個(gè)平板挑取至少2個(gè)可疑菌（包括典型和非典型各2個(gè)），接種TSI三糖鐵、LIA賴(lài)氨酸鐵高層斜面（LIA高層深4cm），（松蓋以保持有氧條件防止產(chǎn)生過(guò)多H₂S），在35℃下培養24±2h。

            （2）尿素酶試驗：①陽(yáng)性：棄去。

                             ②陰性：衛矛醇、  氰化鉀、丙二酸鈉、吲哚試驗

5、血清學(xué)：血清學(xué)試驗——沙門(mén)氏菌的分類(lèi)

6、報告結果。

ISO6579沙門(mén)氏菌檢驗流程

1、前增菌：  25g樣+225mLBPW，勻質(zhì)，在37±1℃下培養18 ± 2h。

2、選擇性增菌：（1）0.1ml+10mlRVS，在41.5 ± 1℃下培養24 ± 3h（水浴培養）。

              （2）1ml+10mlMKTTn，在37 ± 1℃下培養24 ± 3h。

3、分離培養：劃線(xiàn)接種選擇性培養基（XLD和第二種選擇性培養基，如 BS），在37℃下培養24~48h（BS），每個(gè)平板挑取至少5個(gè)可疑菌進(jìn)行純培養和確認試驗，在37℃下培養24±3h。

4、生化鑒定：TSI、尿素酶、賴(lài)氨酸脫羧酶、β-牛乳糖、V-P、 吲哚試驗。

5、血清學(xué)：血清學(xué)試驗——沙門(mén)氏菌的分類(lèi)

6、報告結果。

沙門(mén)氏菌檢驗選擇性分離培養

XLD瓊脂：

FDA BAM——典型菌落：粉色菌落，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養物可呈現大的具光澤的黑色中心或幾乎為全部黑色的菌落。

        ——非典型菌落：黃色帶或不帶黑色中心。

ISO——中心黑色、周?chē)�由于指示劑顏色的改變而出現紅色的輕微透明帶。

 

 

沙門(mén)氏菌檢驗選擇性分離培養

BS瓊脂：

FDA BAM——典型菌落：產(chǎn)硫化氫菌落黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周?chē)�的培養基通常開(kāi)始呈褐色，但伴隨培養時(shí)間的延長(cháng)而變?yōu)楹谏�，并有暈環(huán)效應；

         ——非典型菌落：有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色菌落，周?chē)�培養基不變色。

 

沙門(mén)氏菌檢驗選擇性分離培養

HE瓊脂：

FDA BAM——典型菌落：蘭綠色至蘭色，多數菌株產(chǎn)硫化氫，菌落帶或不帶黑色,中心或幾乎全黑色。

         ——非典型菌落：乳糖陽(yáng)性的菌株為黃色中心黑色或全黑色。

 

沙門(mén)氏菌檢驗生化鑒定

TSI：

典型反應：斜面產(chǎn)堿（K）：紅色；底部產(chǎn)酸（A）：黃色；產(chǎn)H₂S：黑色（少數不產(chǎn)）

 

沙門(mén)氏菌檢驗——幾點(diǎn)注意

冷凍樣品解凍需在45℃以下，有自動(dòng)調溫器自控的水浴鍋內不斷攪拌進(jìn)行15min或在2-8℃，18小時(shí)內軟化。

–為保證檢驗的準確性，必須在選擇性培養基上挑取足夠數量的菌落進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定。

進(jìn)行生化反應時(shí)，應以純培養物進(jìn)行試驗，如出現血清學(xué)陽(yáng)性，而生化反應特征不符合時(shí)，應對接種物進(jìn)行純化，用純化后的培養物重新進(jìn)行生化試驗。

–測試中應同時(shí)接種陽(yáng)性對照菌株。