狂犬病疫苗血清學(xué)診斷

  主要用于疫苗效果檢查或流行病學(xué)調查，包括小鼠中和試驗、空斑減少中和試驗、血凝抑制試驗等。WHO推薦以快速熒光灶抑制試驗(RFFIT)代替小鼠中和試驗。試驗時(shí)血清樣品首先滅活，作倍比稀釋?zhuān)�同時(shí)設陰、陽(yáng)性血清對照。病毒通常采用標準固定毒CVS株。細胞為BHK��21細胞系，細胞濃度為10��５/0.2ml。首先將稀釋的被檢及對照血清0.1ml分別加入96孔培養板中，再在各血清孔中分別加入0.1ml標準病毒稀釋液(100TCID����５０��)，混勻，37℃中和1.5小時(shí)；然后每孔加入10��５細胞，于37℃5%CO��２溫箱培養24小時(shí)，次日傾棄培養液，用pH7.60.01mol/LPBS洗一次，用3%冷丙酮液于-20℃固定10～１５分鐘，棄之，干燥后，加熒光標記的抗狂犬病病毒IgG液,室溫感作30分鐘，餾水洗滌3次(5min/次)，再以0.1%伊凡思藍染色30秒，餾水洗滌3次(3min/次)。封載后鏡檢。在陰、陽(yáng)性對照成立的基礎上，比較實(shí)驗組和陰性血清組的熒光灶，實(shí)驗組中能使熒光灶抑制大(等)于50%的血清最高稀釋度(倍數)，即為被檢血清的中和抗體滴度。�ヒ话闱闆r下,陽(yáng)性對照血清的起始稀釋效價(jià)為2IU/ml。待測抗體的單位，可通過(guò)計算待測抗體和標準血清滴度的比值得出。其公式：�ぁ糐Z〗待測抗體單位(IU/ml)=〖SX(〗待測血清IF抑制滴度〖〗標準血清IF抑制滴度〖SX)〗×2�ヒ话阋�0.5IU/ml判定為抗體陽(yáng)轉的最低效價(jià)，即表示機體對狂犬病病毒感染具有抵抗力。�ゴ送�，為了檢測動(dòng)物體內的狂犬病病毒抗體，李金中等還報道了ELISA阻斷法，即先包被已知陽(yáng)性抗原，用被檢血清與固定抗原感作，洗滌后，再加已知酶標記的陽(yáng)性血清，洗滌顯色后，出現顏色反應則表明待測血清中無(wú)特異性抗體。未呈現顏色反應的樣品,說(shuō)明血清中有狂犬病病毒特異性抗體，酶標抗體的結合被阻斷,因此判定為狂犬病病毒抗體陽(yáng)性。�ゴ送�，還有斑點(diǎn)免疫測定、對流免疫電泳、Western印跡等診斷方法，在此不一一贅述。�ピ谌诵蟊还返葎�(dòng)物咬傷后，不可將這些動(dòng)物立即殺死，應關(guān)在鐵籠內飼養2～3周。如果動(dòng)物在這幾周內不出現狂犬病的癥狀，按照多年來(lái)通用的規定，可以認為此動(dòng)物未患狂犬病。但如前述，由于近年來(lái)常在狂犬病疫區發(fā)現“頓挫型感染”，這些動(dòng)物本身可能不出現狂犬病的癥狀，但其唾液內含有病毒。應用上述血清學(xué)試驗作雙份血清檢查，可能有助于這些頓挫型患畜的檢出。