取腦或唾液腺等材料用緩沖鹽水或含10%滅活豚鼠血清的生理鹽水研磨成10%乳劑，腦內接種5～7日齡乳鼠，每只注射0.03ml，每份標本接種4～6只乳鼠。唾液或脊髓液則在離心沉淀和以抗生素處理后，直接作接種用。乳鼠在接種后繼續由母鼠同窩哺養，3～4天后如發(fā)現哺乳力減弱，痙攣，麻痹死亡，即可取腦檢查包涵體，并制成抗原，作病毒鑒定。如經(jīng)7天仍不發(fā)病，可殺死其中2只，剖取鼠腦作成懸液，如上傳代。如第二代仍不發(fā)病，可再傳代。連續盲傳三代，第一、二、三代總計觀(guān)察4周而仍不發(fā)病者，作陰性結果報告。也可應用3周齡以?xún)鹊挠资�，如上作腦內接種，每只0.03ml。這種日齡的小鼠通常在接種后15天內發(fā)病，主要癥狀是肌肉震顫，步樣失調,麻痹，最后死亡。如有條件，可同時(shí)接種倉鼠腎原代細胞或倉鼠腎繼代細胞和BHK21細胞等。新分離的病毒可用電子顯微鏡直接觀(guān)察，或者應用抗狂犬病特異免疫血清進(jìn)行中和試驗或血凝抑制試驗加以鑒定。中和試驗采用倉鼠腎細胞作細胞病變抑制試驗或蝕斑減數試驗，或者應用小鼠腦內接種法。即將標準免疫血清與新分離病毒進(jìn)行試驗，如新分離病毒被已知狂犬病免疫血清所中和，則即證明新分離病毒為狂犬病病毒。具體方法請參閱本書(shū)第十四章有關(guān)節段。血凝抑制試驗應用以BHK21細胞培養的新分離病毒作為抗原。于0～4℃先測定其對鵝紅細胞的凝集滴度，以出現凝集的抗原最高稀釋度作為1個(gè)血凝單位。用4個(gè)血凝單位的被測抗原、標準陽(yáng)性抗原及陰性抗原分別與不同稀釋度的標準血清感作后，再加0.25%鵝紅細胞。如果標準血清對待測抗原的抑制與其對標準陽(yáng)性抗原的抑制價(jià)相同或相近，則即可作狂犬病病毒的陽(yáng)性判定結果。
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