摘要：采用不同的滅菌措施，包括不同的滅菌劑、濃度，對魚(yú)腥草的帶芽莖段進(jìn)行滅菌處理，研究其污染率和污染速率的變化，尋找建立無(wú)菌培養系最適宜的方法。結果表明：最適宜的滅菌措施為：外植體莖＋70 ％酒精浸30s + 0.1 % 升汞10-12min ＋青霉素＋鏈霉素15min 。
關(guān)鍵詞：魚(yú)腥草；無(wú)菌培養系；污染率
魚(yú)腥草為三白草科植物蕺菜的全草。其以味似魚(yú)腥而得名，是多年生的草本植物，又名側耳根、臭根草、魚(yú)鱗草等，具有清熱解毒，消癰排膿，名利尿通淋等功能，用于痰熱喘咳、熱痢、熱淋、癰腫瘡毒等。其嫩葉、根莖可食用，為長(cháng)江以南各省區大眾喜愛(ài)的美味。魚(yú)腥草具有廣譜的抗菌作用，對免疫功能也有一定的增強效果。目前，魚(yú)腥草被國家衛生部正式確定為“既是藥品，又是食品”的極具開(kāi)發(fā)潛力的資源之一。國內對魚(yú)腥草的分布、栽培、化學(xué)成分、藥理、臨床應用及提取成分均有研究，并利用組織培養技術(shù)，研究魚(yú)腥草再生植株。但在研究過(guò)程中魚(yú)腥草的外植體易受污染，本研究是通過(guò)建立魚(yú)腥草的再生植株體系，旨在為魚(yú)腥草栽培和開(kāi)發(fā)利用提供新技術(shù)參數和理論依據。
1 材料與方法
1.1 材料魚(yú)腥草當年生幼嫩的莖段取自安徽省廣德縣。
1.2 方法取魚(yú)腥草莖段用流動(dòng)清水沖洗后，采用不同方法對外植體進(jìn)行滅菌處理，對滅菌劑的種類(lèi)，處理時(shí)間等進(jìn)行了細致的設計和篩選，共設計了以下24 種不同的滅菌措施。
魚(yú)腥草外植體滅菌措施為：第1 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉8min ；第2 組70 ％酒精30s, 10 ％次氯酸鈉10min ；第3組70 ％酒精30s, 10 ％次氯酸鈉10min ；第4 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉20min ；第5 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞5min ; 第6 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞8min ；第7 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞10min ；第8 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞12min ；第9 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉8min ，青霉素15min ；第10 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉8min ，青霉素＋鏈霉素15min ; 第11 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉10min ，青霉素15min ; 第12 組70％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉l0min ，青霉素十鏈霉素15min ；第13 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉15min ，青霉素15min ；第14 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉15min ，青霉素＋鏈霉素15min ；第15 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉20min ，青霉素15min ；第16 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉20min ，青霉素＋鏈霉素15min ；第17 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞smin , 青霉素15min ；第18 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞5min ，青霉素＋鏈霉素15min ；第19 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞8min ，青霉素15min ；第20 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞8min ，青霉素＋鏈霉素15min ；第21 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞10min ，青霉素15min ；第22 組70 ％酒精30s , 0.1%升汞10min ，青霉素＋鏈霉素15min ；第23 組70 ％酒精30s, 0.1 ％升汞12min ，青霉素15min ；第24 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞12min ，青霉素＋鏈霉素15min 。
2 結果與分析
2.1 滅菌措施對外植體莖的滅菌效果的影響 詳見(jiàn)表1 。由表1 可以看出，經(jīng)過(guò)不同的滅菌措施處理的接種材料莖，其滅菌效果差異明顯。滅菌效果好的是第15 、16 、22 、23 、24 組；但15 、16 組褐化率較高，分別為75 ％和91.7 % ，滅菌效果較好的是第7 、8 、24 組；滅菌效果差的是第1 、2 、9 、10 組。綜合滅菌效果和褐化情況，21 、22 、23 、24 組滅菌措施對莖段滅菌效果最好。
2.2 滅菌措施對外植體莖的菌類(lèi)侵染的抑制效果各種不同滅菌措施對外植體莖段的菌類(lèi)的抑制能力如表2 所示。在設計的24 組滅菌措施中以16 組和24 組表現出對材料上菌類(lèi)的滋生侵染的抑制效果最強，接種后一直沒(méi)有被污染，污染率是伍其次，抑制菌滋較好的是第4 、7 、8 、15 、22 、23 組，接種后第4d 才出現污染，污染率低；抑制菌滋生效果最差的是第l 、2 、5 、9 、10 、11 、12 、17 、18 組，接種第3d 出現大量污染，累計污染率為100 %。
2.3 抗生素對材料滅菌效果的影響根據第11 、12 組與第2 組滅菌措施的比較，兩組培養基完全相同，第11 組用了單獨青霉素滅菌，而第12 組采用青霉素，鏈霉素混合液處理，其他滅菌藥劑，濃度，處理時(shí)間均相同。結果表明，第12 組材料滅菌效果略?xún)?yōu)于第2 、11 組，第13 和14 與第3 組，，第15 和16 與第4 組，19 和20 與第5 組，21 和22 與第6 組，23 和24 與第7 組比較又同樣得出以上結論。說(shuō)明青霉素，鏈霉素混合液對外植體滅菌有一定的積極作用，比不用或單獨用青霉素滅菌效果好。
3 小結與討論
根據上述的研究結果，對魚(yú)腥草組培中無(wú)菌培養系建立的具體技術(shù)措施總結：( 1 ）對魚(yú)腥草對外植體莖段滅菌效果最佳的處理措施為：外植體＋70 ％酒精30s + 0.1 ％升汞10 一12min ＋青霉素＋鏈霉素15min ; ( 2 ）青霉素和鏈霉素混合液浸泡外植體有一定的滅菌效果，比單獨用青霉素滅菌效果好。青霉素和鏈霉素混用對菌類(lèi)滋生的抑制效果好，比單用青霉素對菌類(lèi)滋生的抑制效果強。（3 ）魚(yú)腥草的外植體莖用升汞滅菌的滅菌效果及對菌類(lèi)滋生的抑制效果比用10 ％次氯酸鈉處理效果好。
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