馬流感病毒

�ヱR流感是早有報道的疾病。Short(1749年)最早認為馬流感與人類(lèi)疾病可能有關(guān)。他談到1688年在英格蘭和愛(ài)爾蘭發(fā)生人流感前，馬就有類(lèi)似人流感的癥狀。Thompson(1852年)也報道了1732年在英國愛(ài)丁堡發(fā)生人流感之前，有不少馬匹發(fā)生咳嗽、流鼻涕等癥狀。Gibson(1754年)對這次馬流感作了詳細的記載，其臨床癥狀和流行病學(xué)與現今觀(guān)察到的馬流感情況完全相符�，F已充分證明，人和動(dòng)物的流感病原是同屬于正粘病毒科的流感病毒。不過(guò)在1955年以前，由于馬流感的病原體尚未搞清楚，因而文獻上所敘述的“馬流感”，可能包括有馬鼻肺炎、病毒性動(dòng)脈炎、馬傳染性支氣管炎、鼻病毒感染以及由流感病毒引起的馬流感等多種疾病。近些年來(lái)，通過(guò)病原學(xué)和免疫學(xué)研究，對于上述各種疾病的病原體已經(jīng)認識清楚。1956年Sovinova等在布拉格從流感病馬體內分離出一株病毒，經(jīng)鑒定為甲型流感病毒。命名為A/馬/1/布拉格/1/56(即馬甲1型)；1963年Waddell等在美國的邁阿密州，從馬體又分離出一株在抗原性上與馬甲1型流感病毒不同的甲型流感病毒，命名為A/馬/2/邁阿密/1/63(即馬甲2型)。到目前為止，馬流感病毒只有這兩個(gè)在抗原性上不同的亞型。這兩個(gè)亞型病毒具有甲型流感病毒共有的補體結合性抗原，但血凝抑制試驗和病毒中和試驗有區別。根據多年來(lái)在各國所作的抗體調查和病毒分離試驗結果，證明由這兩株病毒引起的馬流行性感冒，廣泛分布于世界各地。�ヱR甲1型流感曾發(fā)生于瑞典、捷克斯洛伐克、羅馬尼亞、前蘇聯(lián)、美國、墨西哥、丹麥、澳大利亞、德國、荷蘭、波蘭和英國；馬甲2型流感曾發(fā)生于美國、巴西、英國、法國、烏拉圭、阿根延、意大利、羅馬尼亞、澳大利亞、前蘇聯(lián)和日本。1974年夏到1975年春，我國一些省份也暴發(fā)了馬流感，經(jīng)過(guò)血清學(xué)檢查以及病毒的分離和鑒定，證明是由馬甲1型流感病毒引起的。1989年春又在東北地區發(fā)現了馬甲2型病毒引起的流行，并且分離到了病毒。��

〖BT4〗1.抵抗力�ァ糎T5SS〗馬流感病毒對外界抵抗力很弱，56℃加熱數分鐘即可喪失感染力。對紫外線(xiàn)、甲醛、稀酸等敏感。脂溶劑、合成去污劑、肥皂和氧化劑都能使病毒滅活。對低溫的抵抗力較強，傳染性鼻分泌物于5℃保存二天，仍可分離出病毒。在-20℃以下，病毒的活力可保存數月之久。��

〖BT4〗2.培養�ァ糎T5SS〗馬流感病毒最易感染雞胚，因此雞胚最常用于病毒的分離培養。將被檢病料接種于9～11日齡雞胚的羊膜腔和尿囊腔內，35℃培養2～4天，可在羊水和尿囊液中獲得大量的病毒。馬流感病毒能在雞胚成纖維細胞、倉鼠腎細胞、猴腎細胞、牛腎細胞以及倉鼠肺傳代細胞培養物內增殖，但以雞胚細胞培養物內的病毒感染價(jià)最高。也有用馬腎細胞初代分離馬流感病毒(馬甲2型)獲得成功的報道。感染細胞培養物內細胞病變的特征是形成合胞體，細胞腫脹變圓，稍晚則出現核圓縮，甚至脫落，并出現血凝和紅細胞吸附特性。��Yamagishi等比較了非洲綠猴腎(Vero,GMK－2)、牛腎(MDBK)、犬腎(MDCK)、豬腎(SK－K)以及來(lái)源自豬胚腎(ESK)的傳代細胞系對馬流感病毒邁阿密株和布拉格株的敏感性。結果證明這兩株病毒均能在所有這些細胞系中增殖，并有致細胞病變作用，細胞變圓、聚團和最后崩解。但以來(lái)源自豬胚腎的ESK細胞最為易感。馬流感病毒經(jīng)鼻腔感染，可逐漸適應于小鼠，盲傳數代后可使小鼠發(fā)生肺炎。部分或多數小鼠死亡。乳鼠經(jīng)腦內注射馬流感病毒可引起腦炎。對倉鼠經(jīng)鼻接種病毒，也能引起感染。��

〖BT4〗3.抗原性�ァ糎T5SS〗馬甲1型流感病毒的抗原組成為H��7N��7，馬甲2型流感病毒的抗原組成為H��3N��8。如按1980年2月世界衛生組織會(huì )議所建議的流感病毒命名法，則馬甲1型流感病毒的HA抗原與人流感病毒H��3和禽類(lèi)流感病毒H��7相同；但在自然條件下，馬和人流感病毒的種間交叉感染是不存在的，也沒(méi)有交叉保護作用。馬甲1型和馬甲2型兩個(gè)亞型病毒之間，也不能產(chǎn)生交叉免疫性。

�ァ糂T4〗4.病原性�ァ糎T5SS〗自然條件下，馬流感病毒只引起馬屬動(dòng)物發(fā)生流行性感冒，無(wú)年齡、性別、品種的差異。主要經(jīng)呼吸道飛沫感染，亦可通過(guò)被污染的飲水、飼料經(jīng)消化道感染，還能通過(guò)交配傳染。病馬退熱后可能較長(cháng)時(shí)間帶毒和排毒，成為傳染源。本病一年四季均可發(fā)生。北方地區以春夏之交多發(fā)。本病傳播迅速，在易感畜群中短期內引起廣泛流行，發(fā)病率極高，有時(shí)可達100%。�ヱR匹感染流感病毒后，經(jīng)過(guò)1～3天的潛伏期，突然發(fā)生高熱，有時(shí)可達40～41℃。呼吸、脈搏加速，精神沉郁，食欲減退。鼻粘膜潮紅，發(fā)熱時(shí)伴有干咳，后變濕咳，鼻孔有漿液性～粘液膿性分泌物。病馬流淚、羞明，眼瞼腫脹，伴有漿液—粘液乃至膿性分泌物。通常流感病馬的癥狀比較一致，但由于病毒的毒力大小、個(gè)體抵抗力的強弱以及飼養管理的好壞而有所差別，主要在于輕重程度之分。�ゲ∷缆室话銥�0��1%～0��4%，不超過(guò)1%。但對未受母源抗體保護的幼駒，可較多地引起致死性感染。如在發(fā)病時(shí)或病愈后繼續使役，可能引起嚴重的并發(fā)癥，特別是胃腸炎和肺炎，則死亡率增高，有時(shí)超過(guò)5%。�チ鞲胁《窘�(jīng)呼吸道侵入馬體，對呼吸道粘膜有特別的親和力。病毒侵入細胞后幾小時(shí)，便在細胞內形成很多成熟的病毒粒子。隨著(zhù)感染細胞的破壞，病毒釋放于呼吸道內，感染更多的粘膜上皮細胞，當病毒在上皮細胞內增殖達一定程度時(shí)，就引起局部組織的病理變化和全身癥狀。

�ァ糂T4〗5.免疫�ァ糎T5SS〗馬流感病毒感染的獲得性免疫是持久的。�プ匀桓腥竞蟮目祻婉R有較長(cháng)時(shí)期的免疫力。體內血凝抑制抗體也可保持相當長(cháng)的時(shí)間。曾對1974年夏至1975年初在我國暴發(fā)的馬甲1型流感自然感染后的部分康復馬，逐年進(jìn)行了血凝抑制抗體的水平調查，結果證明這些馬匹至1980年仍保有一定水平的血凝抑制抗體。�ヒ呙珙A防也有良好效果。目前使用的疫苗是以雞胚增殖的馬流感病毒，將其精制濃縮和滅活后制成的。有水劑疫苗和佐劑疫苗兩種。�ト缜八�述，馬流感病毒有馬甲1型和馬甲2型兩個(gè)亞型毒株，通常就用這兩個(gè)亞型毒株作為種毒制備疫苗。但是，各次流行時(shí)病毒抗原結構經(jīng)常有變化，可能影響疫苗的預防效果。因此，應考慮使用當地流行時(shí)分離出來(lái)的毒株制備疫苗，其免疫效果更為理想。�ヒ呙缰圃鞎r(shí)，先將保存的馬流感種毒，進(jìn)行傳代，提高和穩定種毒的血凝效價(jià)。馬甲1型和馬甲2型可以制成二價(jià)疫苗。二價(jià)疫苗不僅使用方便，免疫效果也較理想�，F將疫苗的制備程序簡(jiǎn)要概括如下。�グ闯Ｒ帉⒈４娴膬蓚�(gè)亞型種毒啟封后，進(jìn)行雞胚傳代，當血凝滴度穩定在1∶640以上時(shí)，即可作為種毒使用。應用9～11日齡的雞胚增殖病毒，經(jīng)尿囊腔途徑接種病毒尿囊液0��2ml后，置33～35℃溫室中培養48小時(shí)。隨后將雞胚移至普通冰箱過(guò)夜，以減少出血。翌日將雞胚取出，按無(wú)菌操作程序將尿囊液吸出，收集于滅菌瓶中。立即進(jìn)行無(wú)菌試驗和血凝效價(jià)測定。而后向感染尿囊液加入5%福爾馬林，使福爾馬林的最終含量為0��05%，加塞并充分振蕩后，置于4～8℃冰箱中進(jìn)行滅活，持續7天，每天振蕩一次。滅活期滿(mǎn)后，取樣進(jìn)行病毒滅活效果試驗。��應用福爾馬林滅活苗免疫馬，所產(chǎn)生的免疫保護作用僅能維持3個(gè)月，這一方面取決于疫苗自身的免疫原性，更重要的是馬匹本身對疫苗免疫的反應能力。為了提高疫苗的免疫力，可加入氫氧化鋁或油類(lèi)等佐劑。檢定合格的單苗，按馬甲1型1∶640血凝價(jià)、馬甲2型1∶2560血凝價(jià)的比例，將兩種單苗混合后即為二價(jià)疫苗。�リP(guān)于馬匹的免疫注射程序問(wèn)題，實(shí)驗證明馬匹在第一年以三個(gè)月的間隔接種二次，以后每年接種一次即可。免疫母馬所產(chǎn)的幼駒，可通過(guò)初乳獲得1～2個(gè)月的被動(dòng)保護力。這些幼駒，應在3月齡注射疫苗，6個(gè)月再強化注射1次。高免血清也能提供近3周的保護力，主要用于易感幼駒和貴重種馬。�リP(guān)于馬流感弱毒疫苗的應用，尚未見(jiàn)有報道，其主要原因在于注射后能引起全身反應。

�ァ糂T4〗6.診斷�ァ糎T5SS〗本病發(fā)病快，傳播迅速，幾天內便可波及全群馬屬動(dòng)物。且無(wú)年齡、性別的差異，而臨床癥狀又比較一致。根據這些臨床表現和流行病學(xué)材料，通常即可作出初步診斷。��實(shí)驗診斷多采用血清學(xué)試驗或病毒分離。常用血凝抑制試驗測定患畜的急性期和恢復期雙份血清，如抗體升高4倍以上，即可診斷為流感病毒感染。急性期血清應在病馬發(fā)病2～3日內采取，恢復期血清最好在發(fā)病后2～4周采集。雙份血清必須在同次試驗和相同的條件下進(jìn)行，以保證結果的可靠性。�パ�清抗體檢測方法還包括ELISA、單向輻射溶血試驗(SRH)等。病毒定性診斷方法有熒光抗體法、間接熒光抗體法等。�ゲ《痉蛛x一般采取急性期病馬鼻腔分泌物，以羊膜腔(或同時(shí)接種尿囊腔)途徑接種9～11日齡雞胚，置35℃孵育3～4天后，分別收獲尿囊液和羊水。取收獲物一部分作血凝試驗，另一部分繼續作雞胚繼代。如出現血凝，可與標準陽(yáng)性血清作血凝抑制試驗、最后定性。經(jīng)雞胚盲傳3～5代仍為陰性的標本，判為陰性結果。