流行性乙型腦炎病毒的血清學(xué)診斷

 

　　(2) 血清學(xué)診斷：包括補體結合試驗、血凝抑制試驗以及中和試驗。血凝抑制抗體和 中和抗體存在于IgM和IgG兩種免疫球蛋白中，而補體結合抗體只存在于IgG部分內。�ァ�

�、� 補體結合試驗：特異性較高，是流行病學(xué)上確認乙腦的一種常用方法。 但因補體 結合抗體的出現較晚，動(dòng)物大多于發(fā)病后2周左右才呈陽(yáng)性反應， 故只作為回顧性診斷 之用。作者等對小鼠作人工感染試驗，在腹腔接種亞致死量乙腦病毒以后， 補體結合抗體于接種后11～12天達陽(yáng)性效價(jià)。4匹人工感染馬(見(jiàn)“病原性”節) 在接種 后10～14天開(kāi)始呈現陽(yáng)性效價(jià)。補體結合抗體在動(dòng)物體內的維持時(shí)間不超過(guò)一年。通常以 被檢血清1∶4稀釋度呈“++”反應強度時(shí)判為陽(yáng)性。 但因人及動(dòng)物中隱性感染的大量存 在，近年來(lái)又普遍應用疫苗接種，因此，根據單份血清的測定結果，往往不能作出肯定 診斷。只有發(fā)病早期和恢復期雙份血清的抗體效價(jià)對比，才有診斷價(jià)值。一般是在初診 時(shí)和恢復期(病后2～3周以上)各采血1次，并在同一次補體結合試驗中進(jìn)行測定。 如果恢 復期血清比初診血清的效價(jià)增高4倍以上，即可判為陽(yáng)性， 說(shuō)明患畜這次發(fā)病是由乙腦 引起的。�ァ　⊙a體結合試驗的操作方法請參閱本書(shū)第十四章。��

　�、� 血凝抑制試驗：乙腦血凝抑制抗體較補體結合抗體出現得早， 一般在病后第4～5 天開(kāi)始出現，病后2周左右達高峰。作者等發(fā)現小鼠在人工接種乙腦病毒后 的第7天即開(kāi)始出現血凝抑制抗體。因此，測定血凝抑制抗體可以較早地作出診斷。  關(guān)于馬騾血凝抑制抗體的陽(yáng)性?xún)r(jià)，國內沒(méi)有標準，作者等根據疫區和非疫區乙 腦流行期前后近200匹馬騾血清的兩次檢測，初步規定1∶ 40以上的血凝抑制效價(jià)為陽(yáng)性 感染價(jià)。對臨床單個(gè)病例，也應按雙份血清法判定，即恢復期血清的血凝抑制效價(jià)為急性 期的4倍以上者才具有診斷意義。�ァ　∮捎谌撕蛣�(dòng)物感染乙腦病毒后，血清中最先產(chǎn)生IgM抗體，數周后才出現IgG抗體， 此時(shí)IgM抗體已經(jīng)減少乃至消失。因此，鑒定動(dòng)物血凝抑制抗體是IgM還是IgG， 有 著(zhù)早期診斷的意義。如果血凝抑制抗體是IgM，則即表示該動(dòng)物是新近感染， 如果血凝 抑制抗體是IgG，則說(shuō)明該動(dòng)物是早先的感染。�ァ　�測定IgM抗體時(shí)，一般應用2�矌�基乙醇(2�睲E)法。2�矌�基乙醇(HS•CH��2•CH��2OH ) 含 有巰基，可將大分子的IgM抗體裂解成7S的小分子球蛋白，后者沒(méi)有免疫活性。因此，  比較同一血清在2�睲E處理前后的血凝抑制效價(jià)，即可查出血清中呈現免疫活性的抗體是 否就是IgM。但是必須指出，2�睲E裂解IgM的作用是可逆的。如果用透析法將2�睲E除去，  即可在一定程度上恢復大分子抗體球蛋白及其免疫活性。測定時(shí)必須充分注意。�ァ　∪缟鲜�，乙腦病毒與墨累山谷腦炎病毒、西尼羅病毒和圣路易腦炎病毒比較接近， 在血清學(xué)上，特別是血凝抑制試驗和補體結合試驗中出現一定程度的交叉反應，但同種 病毒及其抗體之間的反應效價(jià)最高，仔細比較，不難鑒別。應用動(dòng)態(tài)血凝抑制試驗，更 易判定。�ァ�

�、� 中和試驗：人或動(dòng)物感染乙腦病毒后7天左右出現中和抗體。中和抗體在動(dòng)物體內 的存在時(shí)間較長(cháng)，可達一年以上。因此也需要進(jìn)行雙份血清測定才有診斷價(jià)值。中和 試驗可在小鼠、雞胚或組織培養細胞上進(jìn)行。通常按固定量病毒和稀釋血清的方法進(jìn) 行，因為這樣可以直接測出待檢血清的效價(jià)(請參閱本書(shū)第十四章)。�ァ　⊥跤瞄畧蟮烙脗}鼠腎原代細胞進(jìn)行中和試驗，方法是將各種稀釋度的待檢 血清0��1ml、10～100個(gè)TCID��5��0的病毒0��1ml和維持液0��8ml充分混合，不用感作，直 接加入細胞培養管(小瓶)，于5～6天后判定結果。試用于豚鼠、馬和兒童免疫前后的雙份血 清，都獲得滿(mǎn)意結果。�ァ　、� 酶聯(lián)免疫吸咐試驗(ELISA)：Chang等應用生物標記的蛋白A　ELISA，檢測人 、猴、豬、馬、狗、野兔和鼠中的JEV抗體，得到滿(mǎn)意的結果。Ohkubo等應用ESL IA進(jìn)行了豬的JEV血清流行病學(xué)調查。�ァ�

　(3) 反轉錄�捕嗑勖告準椒磻�(RT�睵CR)：　　Murakami等應用套式RT�睵CR法檢測到0��1ml全血標本中少至3～5個(gè)乙腦病毒粒子。 該 法與其它檢測JEV抗原相比,高度特異、靈敏。��