流行病學(xué)-豬生殖和呼吸系統綜合癥病毒��

 

7.流行病學(xué)�ッ绹�1987年首先暴發(fā)PRRS，但后來(lái)用血清學(xué)方法證實(shí)1985和1986兩年在美國收集的豬血清中就已經(jīng)存在PRRSV的特異性抗體。1990年6月歐洲首次在德國發(fā)現該病流行，年末又在荷蘭發(fā)現該病，兩國的集約化豬場(chǎng)有近4000個(gè)豬群感染了PRRSV，并很快蔓延到其它歐洲國家。該病在北美和歐洲分別于1989年和1991年達到流行高峰，隨后發(fā)病率逐漸下降。據報道，目前美國豬群的血清陽(yáng)轉率高達50%。�ビ械难芯拷Y果表明PRRS流行后,病毒可在多數豬群中持續存在，其原因至少有以下三個(gè):

①一些母豬在PRRS暴發(fā)的早期可能免受病毒侵害，但在數月后感染發(fā)病，并將病毒傳給其它健康豬；

②育肥豬的病毒血癥一般持續4周，所以育肥豬感染后可成為PRRSV的貯存宿主，并將病毒傳給剛斷奶的仔豬。野外調查表明排毒的種豬、育肥豬是將病毒傳給剛斷奶仔豬的一個(gè)重要因素；

③易感初產(chǎn)母豬可能是病毒在豬群中持續存在的另一因素。��

PRRSV的主要傳播途徑是接觸感染、空氣傳播和精液傳播。將感染豬特別是隱性感染豬引入易感豬群是該病流行的重要原因。實(shí)驗證明，易感豬可經(jīng)口、鼻腔、肌肉、腹腔、靜脈及子宮內接種等多種途徑而感染病毒。豬感染病毒后2～14周均可通過(guò)接觸將病毒傳播給其它易感豬。從病豬的鼻腔、糞便拭子及尿中均可分離到病毒。據報道,引入感染豬后易感豬群發(fā)生PRRS的潛伏期，最短為3天，最長(cháng)37天。1990年德國發(fā)生PRRS后，病毒可能借助空氣途徑(季候風(fēng))，傳播到其它歐洲國家。歐洲的高濕、低溫、低風(fēng)速構成了病毒經(jīng)空氣傳播的適宜條件。精液傳播途徑已被證實(shí)，用感染公豬的精液人工授精可使健康初產(chǎn)母豬血清陽(yáng)轉。將感染公豬的精液注射到易感母豬也可引起血清陽(yáng)轉。臨床觀(guān)察表明,精液傳播病毒的持續時(shí)間較短，一般不到一周時(shí)間。��Zimmerman等(1993)報道，某些鳥(niǎo)類(lèi)可能傳播PRRSV。用含10��4個(gè)TCID����50�狿RRSV的飲水喂養綠頭鴨、麝鴨、珍珠雞和雜交肉雞，5～24天后再進(jìn)行病毒分離，結果除麝鴨外，均能從其它3種鳥(niǎo)類(lèi)動(dòng)物的糞便中分離到病毒。�ピ趹言性缙�，病毒可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，但其機制尚不清楚，推測這可能與感染的巨噬細胞通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內有關(guān)。但在懷孕中期病毒很難通過(guò)胎盤(pán)而感染胎兒。目前尚不清楚病毒是如何引起胎兒死亡的。�ス�豬感染后除表現一般臨床癥狀外，還可見(jiàn)精子質(zhì)量降低，表現為精子活力下降，畸形精子增多。雖然未能從睪丸和附睪組織中分離到病毒，但最近建立的PCR方法卻能檢測到精液中存在病毒RNA。目前尚不清楚精液中的病毒是從哪里來(lái)的。��

 

  8.免疫�ヘi對PRRSV感染可產(chǎn)生免疫力。感染后6～7天即可從血清中檢測到抗體反應，但中和抗體產(chǎn)生緩慢，需6～8周甚至更長(cháng)時(shí)間，這可能是病毒血癥可持續4周以上的原因。因為母豬的中和抗體產(chǎn)生較快，其病毒血癥的時(shí)間也就較短。中和抗體可以在CL2621細胞上進(jìn)行中和試驗來(lái)測定，但不能用PAM來(lái)測定。因為抗體可促進(jìn)病毒對PAM的感染。這種抗體依賴(lài)性感染增強的原因可能是病毒與抗體形成免疫復合物后，借助細胞表面的Fc受體而與PAM結合，從而促進(jìn)了病毒進(jìn)入細胞。據報道PRRSV接種PAM的同時(shí)，加入特異抗血清，可使培養的病毒滴度增加10～100倍。有實(shí)驗證明，PRRSV與陽(yáng)性血清一同注射到懷孕中期胎兒,這時(shí)的病毒復制較單獨注射病毒時(shí)明顯增強。與PRRSV同屬的LDV感染小鼠后，需要很高的抗體滴度才能阻止LDV感染。體內較低的中和抗體往往不能有效地抑制LDV，所以小鼠的病毒血癥可持續終身。這種現象也存在于其它一些病毒，如人的登革熱病毒(Denv)，當患者體內中和抗體滴度很高時(shí)，機體可以抵抗病毒的再次入侵,而當中和抗體滴度較低時(shí)，病毒的增殖則進(jìn)一步增強，病情更加嚴重，特別是異型Denv的再次入侵。這種現象使人們目前無(wú)法研制出有效的Denv疫苗。PRRSV與Denv具有相似的地方，如敏感細胞都是Fc受體陽(yáng)性,都具有抗體依賴(lài)性感染增強現象以及均有不同的抗原變異株。這在研究PRRSV疫苗過(guò)程中是值得注意的。最近國外已試制成功細胞培養滅活苗,但有關(guān)疫苗的免疫效果,學(xué)者們的評價(jià)尚不一致。�プ罱�有人報道,與在肺部造成局部性免疫抑制相反，感染PRRSV可增強豬對異種抗原的免疫應答反應(既可以增強體液免疫亦可增強細胞免疫)。��

  9�痹\斷�ピ谖闯晒Ψ蛛xPRRSV之前，該病的診斷主要靠病豬典型的臨床癥狀，特征性的組織學(xué)病理變化，特別是間質(zhì)性肺炎，當然要排除其它已知能引起繁殖障礙及呼吸道癥狀的病原。目前，一般根據臨床癥狀、病理組織學(xué)變化、病毒分離鑒定、血清學(xué)方法等的結果進(jìn)行綜合診斷。��

(1)臨床診斷：�ヒ驗榇嬖诖罅康膩喤R床感染，臨床癥狀是診斷該病的首要條件。但是不同豬群發(fā)病后的臨床癥狀有所不同，只有暴發(fā)急性PRRS時(shí)，臨床診斷才有重要意義。Cromwijk提出了一種簡(jiǎn)單的臨床診斷方法，共有3項指標:①流產(chǎn)或早產(chǎn)超過(guò)8%；②死胎率超過(guò)20%；③仔豬出生后第一周死亡率超過(guò)25%。在14天內，這三項指標中如果有兩項符合，則臨床診斷成立。很顯然，這種標準只適合于急性PRRS。

��(2)組織病理學(xué)檢查：�ピ谖窗l(fā)生繼發(fā)感染的情況下，感染豬一般不表現肉眼可見(jiàn)的病理變化，此時(shí)需要進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。組織病理學(xué)檢查主要適合于發(fā)病仔豬，對母豬、流產(chǎn)胎兒及育肥豬的意義不大。間質(zhì)性肺炎是PRRS最常見(jiàn)的特征性組織病理學(xué)變化。在感染豬，有時(shí)還可見(jiàn)鼻炎、腦炎和心肌炎等組織病理學(xué)變化。

(3)病毒檢測：�ビ糜诓《痉蛛x的細胞有PAM、CL2621和Marc145。不同的毒株對不同的細胞有所選擇，但大多數毒株，特別是從血清中分離病毒時(shí)，都可用PAM。根據病毒的培養特性，電鏡觀(guān)察，再綜合臨床癥狀及病理學(xué)檢測，即可做出初步診斷，但還需進(jìn)行血清學(xué)方法或分子診斷方法進(jìn)行確診。盡管病豬和胎兒的多種組織均可用于病毒分離，但分離效果最好的是肺組織和血清。在分離病毒前，病料和血清樣品必須置于4℃或冰凍保存，以免樣品中的病毒失活。��檢測病毒的血清學(xué)方法有熒光抗體染色和免疫酶測定技術(shù)。應用熒光素FITC或辣根過(guò)氧化物酶標記的多抗或單抗，可以直接快速地檢測病豬肺、脾組織細胞中的病毒抗原，也可以檢測組織培養細胞中的病毒抗原。�プ罱�建立的RT�睵CR檢測方法為快速、特異、靈敏地檢測PRRSV提供了新的技術(shù)。Suarez等(1994)建立了檢測PRRSV的RT�睵CR方法。該方法既可檢測病豬血清、血漿或PAM中的病毒RNA，也可檢測細胞培養物中的病毒RNA，具有很高的特異性和敏感性，與7種常見(jiàn)的豬病毒均不反應。以感染PAM為材料，可以檢測到6��7個(gè)TCID����50��的病毒；如以感染仔豬血清為樣品，可以檢測到約100個(gè)TCID����50��的病毒。Hennings等(1995年)建立了檢測豬精液中PRRSV的RT�睵CR方法，該方法快速、敏感、可靠，實(shí)驗接毒92天后，仍能從精液中檢測出病毒RNA。此外Mardassi等(1994)建立了鑒別PRRSV不同地理毒株的RT�睵CR方法，可以容易地將加拿大毒株(B群)與LV(A群)毒株區分開(kāi)。�ソ�立病毒PCR檢測方法的原則是擴增病毒特異而保守的基因片段。目前建立的RT�睵CR方法主要是擴增PRRSVN蛋白的基因片段，因為N基因是最較保守的。��

(4)血清學(xué)方法:��檢測繁殖障礙母豬是否發(fā)生血清陽(yáng)轉，對PRRS的診斷具有重要意義。目前有4種血清學(xué)方法用于檢測PRRSV抗體，即免疫過(guò)氧化物酶單層試驗(IPMA)、間接熒光抗體試驗(IFA)、血清中和試驗(SN)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。IPMA和IFA均能從感染后6天的動(dòng)物體內檢出PRRSV抗體，兩者在敏感性及特異性上相似。這二種方法同樣適合于檢測PAM、CL2621及Marc145三種細胞中增殖的病毒抗原。SN抗體較IFA抗體出現晚，但比IFA抗體存在的時(shí)間長(cháng)。SN不能在PAM細胞上進(jìn)行，只能在CL2621和Marc145細胞上進(jìn)行。有關(guān)ELISA檢查PRRS抗體的特異性和敏感性,目前的報道不完全一致，但因ELISA可自動(dòng)顯示結果，大規模檢查時(shí)經(jīng)濟方便，如能進(jìn)一步改良，無(wú)疑會(huì )有廣闊的應用前景。