5.抵抗力病毒粒子有一層脂質(zhì)囊膜,所以對乙醚、氯仿等脂溶劑敏感。去氧膽酸鹽易使EAV滅活。病毒在低溫條件下極穩定,但不耐熱。-30℃保存7年仍有活性,4℃可存活35天,但在37℃下僅能存活2天,而56℃30分種就可使其滅活。病毒對酸敏感。對05mg/ml濃度的胰蛋白酶有抵抗力,但易被高濃度的胰蛋白酶所滅活。
6.病原性和流行病學(xué)馬是EAV唯一的自然感染宿主,感染馬發(fā)生嚴重疾病,臨床上主要表現為厭食、水腫和發(fā)熱。組織學(xué)病變主要在血管系統,特別是小動(dòng)脈的壞死。妊娠母馬常發(fā)生流產(chǎn)。人工接種可使驢100%感染,接種病毒后,14日內均可從鼻腔、血液和生殖道中分離到病毒。病毒在驢體內的增殖類(lèi)似于馬,接種10天后出現血清陽(yáng)轉,臨床上除發(fā)熱外沒(méi)有其它發(fā)病癥狀。EAV對驢的致病性尚需進(jìn)一步研究。馬動(dòng)脈炎存在于美國、奧地利、法國、印度、意大利、瑞典、瑞士和英國等國家。美國的標準種馬中存在很高比例的隱性感染。公馬感染后可成為帶毒者,病毒存在于許多公馬的生殖器官,使其成為感染的傳播者,在交配或用感染馬精液進(jìn)行人工授精時(shí),病毒可傳染給易感母馬,并導致發(fā)病。帶毒種公馬在病毒的持續存在和傳播過(guò)程中起著(zhù)十分重要的作用。1993年英國首次暴發(fā)的馬動(dòng)脈炎就是由感染精液在人工授精時(shí)引發(fā)的。從當時(shí)的精液中已分離到EAV。有人認為睪丸酮在建立和維持種公馬的帶毒狀態(tài)是必需的,因為去勢公馬接種EAV后并不發(fā)生持續性感染。EAV具有高度接觸傳染性,呼吸道吸入、交配和人工授精是主要的傳播途徑。人工接種病毒于懷孕母馬及幼駒,可使50%的幼駒死亡,母馬則發(fā)生流產(chǎn)。本病的潛伏期為3~5天。病馬肯定發(fā)熱,但其它癥狀則取決于動(dòng)脈被損害的部位及程度。人工接種EAV強毒2天后可出現病毒血癥,并持續至少9~19天。死亡病例的其它癥狀包括:明顯的結膜炎以及眼瞼和瞬膜水腫,過(guò)多的流淚。鼻粘膜充血并有漿液性分泌物。常見(jiàn)呼吸困難。病馬明顯衰竭,并常伴發(fā)輕重不一的腹痛和水瀉以及軀干水腫。偶爾可見(jiàn)角膜炎、黃疸。病馬出現以淋巴細胞減少為特征的泛白細胞減少癥。臨床病期約14天。所有年齡的馬都易感,但以懷孕母馬為最嚴重,幼駒以及患有嚴重寄生蟲(chóng)病的馬匹也易發(fā)生嚴重感染。人工感染可導致死亡,但自然發(fā)病的死亡率較低。易感懷孕母馬的流產(chǎn)率可達90%以上,流產(chǎn)發(fā)生在感染后的10~33天,通常出現在臨床發(fā)病期或恢復早期。EAV可以突破胎盤(pán)屏障而感染胎兒,胎兒常在發(fā)生流產(chǎn)之前就已死亡。流產(chǎn)胎兒水腫,呼吸道粘膜和脾包膜上有出血點(diǎn)。不論是流產(chǎn)胎兒或已在子宮內死亡的胎兒,都沒(méi)有特征性的動(dòng)脈炎病變。在胎兒的肝、脾和淋巴結中找不到核內包涵體,但易從流產(chǎn)胎兒(特別是其脾臟)中分離出病毒。死亡病例最主要的剖檢變化是全身小動(dòng)脈管內肌層細胞的壞死,內膜上皮病變導致特征性的出血和水腫以及血栓形成和梗死。常見(jiàn)大葉性肺炎和胸膜滲出物。全身性動(dòng)脈炎可導致所有漿膜和粘膜以及肺和中隔等的點(diǎn)狀出血。腎上腺上也有出血。在心、脾、肺、腎、懷孕母馬的子宮、眼結膜、眼瞼、膝關(guān)節或跗關(guān)節以下的皮下組織以及陰囊和睪丸內,均能發(fā)現出血性及水腫樣變化。漿膜腔中含有大量富含蛋白質(zhì)和纖維絮狀物的液體。末期病變包括淋巴結的大量壞死以及盲腸和結腸的粘膜壞死;謴推诓●R的慢性病變包括廣泛的全身性動(dòng)脈炎和嚴重的腎小球性腎炎。在心血管系統的絕大多數部位中都可發(fā)現病變和病毒復制。EAV進(jìn)入機體后,首先感染肺部的巨噬細胞,然后擴散到支氣管淋巴結,在巨噬細胞及內皮細胞中發(fā)生病毒復制,病毒繼而也在其它一些器官的中層肌細胞、間皮和上皮細胞內復制。血栓和梗死常常發(fā)生在腸管和肺臟,也出現在所有伴發(fā)水腫的器官。在實(shí)驗感染后10天,靜脈和淋巴管的病變已大部分消退,但動(dòng)脈管的壞死仍較嚴重。一般需在感染后2個(gè)月,動(dòng)脈才能再生和恢復。
7.免疫學(xué)和血清學(xué)易感馬在自然感染康復后或在用弱毒疫苗免疫接種后,都可產(chǎn)生堅強而持久甚至終生的免疫力。用病毒中和試驗、補體結合試驗、蝕斑減數試驗、瓊脂擴散試驗和間接免疫熒光技術(shù),都可檢出EAV的抗體,也可應用這些方法鑒定EAV,F已公認50%終點(diǎn)蝕斑減數試驗是一種比較敏感的病毒中和試驗。細胞培養的病毒液經(jīng)超聲波處理后,就是很好的補體結合和瓊擴抗原。McCollum等(1970)將Bucyrus原型毒株連續通過(guò)原代馬腎細胞131代(HK131),隨后又通過(guò)原代兔腎細胞111代(RK111),育成一個(gè)弱毒變異株。用200個(gè)TCID50的病毒量肌肉接種易感馬和懷孕馬,均安全。用強毒攻擊,證明在接種后4天就有部分免疫力,接種后10天,產(chǎn)生完全的免疫力,對懷孕母馬也無(wú)任何不良反應。免疫接種后1~3年內攻擊強毒,注苗馬仍有完全的免疫力。疫苗產(chǎn)生的中和抗體最長(cháng)可以持續7年,說(shuō)明弱毒疫苗具有持久免疫力。但鼻內噴霧接種這種弱毒疫苗的馬不能產(chǎn)生堅強有效的免疫力。弱毒株在馬匹連續傳6代,證明這株弱毒沒(méi)有返祖現象。此外,還證明注射疫苗的馬并不排毒和感染與其同居飼養的易感馬。幼駒從母馬獲得初乳抗體的保護力至少可以維持2~4個(gè)月。馬駒的免疫接種應在6月齡時(shí)進(jìn)行。
8.診斷臨床觀(guān)察必須與實(shí)驗室檢驗相結合,才能鑒別臨床癥狀與EA相似的其它疾病,如馬鼻肺炎、馬流感和非洲馬瘟等。
(1)病料采取:急性病例采取全血(加肝素或枸櫞酸鹽抗凝)或沉淀白細胞層,以及鼻分泌物,也可采取流產(chǎn)胎兒的脾臟。尸體剖檢時(shí)采取肺、脾和淋巴結。這些病料制成的組織懸液是較好的病毒分離材料。此外,也可采取可疑病例血清,檢測特異性抗體。
(2)病毒分離:初代分離培養最好應用馬源細胞,例如馬腎、馬睪丸和馬皮膚細胞。已在馬源細胞上適應的病毒,容易在LLCMK2、BSC1、Vero以及BHK21等傳代細胞和兔腎原代細胞上增殖。如有病毒,一般在接種后3~5天出現CPE。此外,EAV還能在馬源細胞以及其它細胞(如BHK21等)中產(chǎn)生蝕斑,故可利用蝕斑技術(shù)進(jìn)行病毒定量測定。
(3)病毒鑒定:主要應用各種血清學(xué)試驗,包括中和試驗、補體結合試驗和蝕斑減數試驗等,其中以蝕斑減數試驗為最敏感。其操作步驟類(lèi)似于EEEV(詳見(jiàn)前述)。應用這一技術(shù)也可檢測血清中的中和抗體滴度,其抑制50%蝕斑單位數的血清最高稀釋度的倒數,就是該血清的抗體滴度。已知的小實(shí)驗動(dòng)物和雞胚都不產(chǎn)生感染癥狀或病變,但可應用家兔、豚鼠、倉鼠和小鼠制備抗病毒血清。
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