2 結果
2.1 外植體的消毒用0.1 %的升汞溶液對葉片消毒2min 、3min 、4min 、5min 、6min 、7min ,其污染率和愈傷組織誘導率見(jiàn)圖1 。圖l 顯示,污染率和愈傷組織誘導率與消毒時(shí)間存在著(zhù)一定的關(guān)系,隨著(zhù)消毒時(shí)間的延長(cháng),污染率逐漸下降,當消毒時(shí)間超過(guò)5 min 后,污染率為零。在3 一4 min 內,污染率較低、愈傷組織誘導率較高。隨著(zhù)消毒時(shí)間的繼續延長(cháng),污染率和愈傷組織誘導率都下降,當葉片消毒時(shí)間為7 min 時(shí),愈傷組織誘導率為O ,污染率也為O ,此時(shí)葉片呈褐色,說(shuō)明消毒液對外植體細胞已造成嚴重毒害。所以用青錢(qián)柳葉片做外植體,消毒時(shí)間應掌握在3 一4 min 內,此時(shí)的污染率較低,愈傷組織誘導率較高。
用0.1 %的升汞溶液對莖段進(jìn)行消毒,消毒時(shí)間設為6min 、8min 、10min 、12min 、14min 、16 min ,其污染率和愈傷組織誘導率見(jiàn)圖2 。結果顯示,隨消毒時(shí)間的延長(cháng),污染率逐漸下降。愈傷組織誘導率在一定范圍(8 一14 min )內與消毒時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系,當消毒時(shí)間為14 min 時(shí),愈傷組織的形成率最高,達到83.33 % ,之后隨消毒時(shí)間的繼續延長(cháng),愈傷組織誘導率開(kāi)始下降。故用莖段做外植體時(shí),0.1 %升汞溶液的消毒時(shí)間應掌握在14 min 左右。
2.2 外植體的選擇從2007 年7 月、9 月、2008 年5 月三個(gè)時(shí)間段采集的葉片和莖段做外植體,接種于改良MS + 6-BA 2.Omg / L 十NAA 0.5mg / L 的培養基上,進(jìn)行外植體的選擇,以期找到誘導愈傷組織能力強的最佳外植體。結果見(jiàn)表1 , 5 月采集的葉片和莖段做外植體,愈傷組織誘導較高,這可能是因為春季剛長(cháng)出的嫩莖攜帶的雜菌較少,再生能力強,酚類(lèi)物質(zhì)含量較低的緣故。
2.3 不同外源激素和不同培養基對青錢(qián)柳莖段愈傷組織的影響本實(shí)驗以MS 培養基和改良MS 培養基為基本培養基,兩種培養基上均增加40 %多菌靈可濕性粉劑1.25g / L 和200mg / L 青霉素,再以二因素正交試驗法設計外源激素(細胞分裂素6-BA 與生長(cháng)素NAA )的配比方案(見(jiàn)表2 ) ,研究不同培養基對青錢(qián)柳莖段愈傷組織的影響,結果見(jiàn)表3 。
結果顯示,MS 和改良MS 均可作為青錢(qián)柳莖段愈傷組織培養的培養基,在特定的激素配比下均可誘導出健康的愈傷組織,以改良MS 培養基十2.0 mg / L6-BA 十0.1 mg / L NAA 更適合青錢(qián)柳莖段的培養,愈傷組織誘導率為83.33 %。
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