青錢(qián)柳愈傷組織培養條件研究的優(yōu)化一
錄入時(shí)間:2009-7-7 8:56:41
來(lái)源：青島海博
摘要：本試驗研究了青錢(qián)柳愈傷組織培養中0.1 ％升汞溶液的最佳消毒時(shí)間、最佳外植體選擇和最適基本培養基。結果表明：以葉片做為外植體，0.1%升汞溶液的消毒時(shí)間應掌握在3 ~ 4 min 之內，以莖段做外植體，消毒時(shí)間應掌握在14 min 左右。從愈傷組織誘導率上看，以當年生幼嫩莖段做外植體誘導效果更佳。MS 和改良后的MS 在特定的激素配比下均可誘導出健康的愈傷組織，以改良MS 培養基＋2.0 mg / L6-BA + 0.1 mg / L NAA 愈傷組織誘導率最高達83.33 % ，更適合青錢(qián)柳莖段的培養。
關(guān)鍵詞：青錢(qián)柳，培養條件，外植體，愈傷組織誘導率
青錢(qián)柳系胡桃科青錢(qián)柳屬植物，為我國特有的珍稀樹(shù)種，是國家重點(diǎn)保護的瀕危植物之一。青錢(qián)柳是一種高大速生闊葉喬木，因其樹(shù)形似柳，果實(shí)圓形似銅錢(qián)，色青而下垂，故名“青錢(qián)柳”。其根、枝、葉均可人藥，具有明顯的降血糖、降血壓、減肥、抗腫瘤、抗衰老、抗過(guò)敏、清熱解暑、提高人體免疫力、促進(jìn)新陳代謝等多種功效，市場(chǎng)前景非常廣闊。但青錢(qián)柳種子發(fā)育差，且具深休眠特性，扦插繁殖的成活率又很低，自然生長(cháng)的數量很少，這在一定程度上制約了該樹(shù)種的開(kāi)發(fā)利用，對產(chǎn)品的繼續開(kāi)發(fā)利用造成了原料供應的困難。研究青錢(qián)柳的組織培養條件，使其苗木產(chǎn)業(yè)化，對加速青錢(qián)柳的開(kāi)發(fā)利用具有重要意義。
1 材料和方法
1.1 材料的采集青錢(qián)柳來(lái)源于河南省南召縣寶天曼國家自然保護區內海拔800m 以上的河谷溪流旁，于不同時(shí)間采集青錢(qián)柳當年生的嫩枝及嫩葉做為外植體，采后立即進(jìn)行低溫密封保鮮，經(jīng)4h 的運輸帶回實(shí)驗室立即進(jìn)行材料的處理。
1.2 外植體的處理將采集到的嫩莖及嫩葉用洗潔精溶液浸洗0.5h ，再用流水沖洗lh ，以除去外植體表面的灰塵和部分菌體。瀝水后，將嫩枝剪成1.5 ~ 2 cm的莖段（含有1 一2 個(gè)不定芽），葉片剪成1 cm*1cm 的方塊，在無(wú)菌條件下用75 ％酒精對葉片和莖段消毒2 一3s，再用0.1 ％的升汞溶液對葉片和莖段進(jìn)行不同時(shí)間（2 min 、3min 、4 min 、5min 、6min 、7 min ）的消毒，之后用無(wú)菌水沖洗4 次。接種前用無(wú)菌的剪刀將葉片四周、莖段兩端剪去少許，接種在培養基上，每瓶接種1 個(gè)外植體，用雙層錫箱紙封口。
1.3 愈傷組織的誘導本實(shí)驗以MS 培養基和改良MS 培養基（除CaCl2、MgSO4全量外，其它元素為全量的3 / 4 , pH 6.0 ）為基本培養基。接種后用智能人工氣候培養箱進(jìn)行培養，培養溫度設為（26 士l ）℃ ，光強度為1200 LX ，設12h 光照12h 黑夜交替進(jìn)行的培養方式。20d 后進(jìn)行愈傷組織誘導率的統計。誘導率=誘導出愈傷組織的外植體數／接種外植體數。
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