萍蓬草的組織培養及快速繁殖的研究二
錄入時(shí)間:2009-7-6 17:20:42
來(lái)源：青島海博
2.2 不同濃度激素對愈傷組織分化培養的影響
將上述繼代培養的愈傷組織用無(wú)菌鑷子分散成顆粒狀后，接種到附加不同濃度的BA ( 0 、0.1 、0.3 和0.5 ）、NAA ( o 、0.1 和0.5 ）和IBA ( 0 、0.l 和0.5 ）的1/2MS + AgNO31.2 培養基上進(jìn)行愈傷組織分化培養。每個(gè)處理接種外植體100 個(gè)愈傷組織顆粒。觀(guān)察愈傷組織的分化情況；以對時(shí)統計愈傷組織分化顆粒數、分化率、每個(gè)愈傷顆粒分化不定芽數，并觀(guān)察分化不定芽的長(cháng)勢。試驗重復了5 次。由表2 可見(jiàn)，在單獨使用BA 或不同濃度BA 與不同濃度NAA 配合使用的培養基上，顆粒狀愈傷組織可以分化。從顆粒狀愈傷組織的分化率、平均分化不定芽數和不定芽的長(cháng)勢看，在1/2MS + AgNO31.2 + BAO.3 + NAAO.1 的培養基上，不僅顆粒狀愈傷組織的分化率達到了99 % ，平均每塊愈傷組織的分化芽數達到7.1 個(gè)，而且分化不定芽長(cháng)勢好。觀(guān)察表明，在這一培養基上誘導分化的不定芽培養到60d時(shí)呈嫩綠色叢生狀，株高度多在0.5cm 以上，重復試驗也得到了相同的結果。把上述誘導培養的不定芽從基部剪下，接種到相同的培養基上進(jìn)行不定芽的繼代分化培養。5 次重復試驗，每代都繼代培養7 代。結果證明，不定芽在這一培養基上經(jīng)過(guò)礴側的繼代培養，每個(gè)不定芽平均可分化培養出5.7 個(gè)高0.5cm 以上、生長(cháng)旺盛的不定芽，所培養的不定芽呈叢生狀。這說(shuō)明1 / 2 MS + AgNO31.2 十BAO.3 + NAAO.1 是誘導萍蓬草顆粒狀愈傷組織和不定芽分化的理想培養基。
2.3 試管苗的生根培養
將上述誘導分化培養的高于0.scm 以上的不定芽，從基部剪下，接種到附加不同濃度NAA ( 0.1 、0.5 和1.0 ）、IAA ( 0.1 、0.5 和1.0 ）和IBA ( 0.1 、0.5 和1.0 ）的1/3MS 液體培養基上進(jìn)行生根培養。每個(gè)處理接種100 個(gè)外植體，試驗重復3 次，觀(guān)察生根培養情況。結果表明，萍蓬草的不定芽在上述液體培養基中均能長(cháng)出根，但生根率和根的生長(cháng)狀況差異很大，以附加IAA的培養基效果最好。尤其是在IAA 濃度為0.5 的培養基上，培養7 一10d 即可形成根原基，隨后根系迅速生長(cháng)，逐漸變綠，并很快形成根莖。培養到40d 時(shí)就可以成為具有長(cháng)約2cm 的根莖、高4cm 左右、葉片伸展、根系發(fā)達、生長(cháng)非常旺盛的試管苗。把具有根莖的試管苗切成具有一段根莖和1 一2 個(gè)葉片的根莖段，接種到相同液體培養基中進(jìn)行生根繼代培養，經(jīng)過(guò)40d 的培養，又會(huì )培養成為一代具有根莖、根系發(fā)達、生長(cháng)旺盛的試管苗。所培養的試管苗沒(méi)有無(wú)效苗。進(jìn)行3 次重復試驗，每次重復試驗繼代培養5 代的結果證明：繼代培養的試管苗根莖生長(cháng)、生根率和長(cháng)勢都基本保持不變。平均每代的繁殖系數為4.2 。上述結果說(shuō)明，1 / 3 MS + IAAO.5 的液體培養基是萍蓬草試管苗生根培養和生根繼代培養的理想培養基。
2.4 試管苗移栽和移植
將具有生長(cháng)旺盛試管苗的培養瓶瓶塞打開(kāi)，放到光照4000~5000LX 、15 一27 ℃ 的條件下煉苗3~4d 后，從培養瓶中取出，移栽到下部具有一層厚10cm 以上園土、上面具有約2cm 深水層的溫室人工水池中，在前10d 防止直射光照的條件下，3 次20 （舊株以上移栽試驗，平均成活率為99.4 ％。將溫室中移栽成活的試管苗于五到七月份移植到池塘的淺水區。移植成活率幾近100 ％。移植的試管苗生長(cháng)旺盛，根莖粗壯，根系發(fā)達。這說(shuō)明萍蓬草試管苗在淺水中容易移栽成活。六月份移植的試管苗，九月份開(kāi)花。
3 ．討論
雖然國內現在已多有水生和濕地植物組織培養的報道，但迄今未見(jiàn)睡蓮屬植物組織培養、無(wú)性系建立和快速繁殖的報道。本研究以萍蓬草的嫩根莖為材料，進(jìn)行了愈傷組織的誘導、愈傷組織的分化、不定芽的生根、試管苗的移栽和移植研究，成功的建立起萍蓬草嫩根莖無(wú)性系，達到了快速繁殖的目的。這不僅可以證明萍蓬草的非分生組織細胞也具有全能性，而且也為萍蓬草的工廠(chǎng)化育苗、滿(mǎn)足人們的需要奠定了技術(shù)基礎，同時(shí)還為該植物的轉基因研究提供了可能。采用愈傷組織繼代培養的方法，萍蓬草嫩根蘋(píng)45d 的繁殖系數為36 ，按照這個(gè)速度進(jìn)行快速繁殖，每年繁殖速度為368 ；采用不定芽繼代培養的方法，40d 的繁殖系數為5.7 ，按照這個(gè)速度進(jìn)行快速繁殖，每年繁殖速度為5.79 ；采用生根繼代的方法，40d 的繁殖系數為4.2 , 按照這個(gè)速度進(jìn)行快速繁殖．每年繁殖速度為4.29 。這說(shuō)明不論采用哪種方法進(jìn)行快速繁殖，每年都能繁殖出大量的試管苗，可以滿(mǎn)足人們觀(guān)賞栽培對萍蓬草種苗的大量需求。在上述三種方法中，雖然采用生根繼代的方法是上述三種方法中最慢的一種，但是，由于采用生根繼代方法進(jìn)行快速繁殖培養的試管苗具有根系發(fā)達、生長(cháng)旺盛、沒(méi)有無(wú)效苗的特點(diǎn)，所以生產(chǎn)上應采用生根繼代的方法進(jìn)行快速繁殖。在進(jìn)行液體生根培養中，培養的試管苗根系為綠色的。這不僅說(shuō)明在缺氧的液體培養基中萍蓬草的根系能夠形成葉綠體、并進(jìn)行光合作用，而且說(shuō)明萍蓬草試管苗能通過(guò)葉片和嫩中，滿(mǎn)足代謝的需要，促進(jìn)了試管苗的旺盛生長(cháng)。
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