非洲馬瘟病毒��

[BT4]7. 免疫�プ匀话l(fā)病后恢復的馬騾，一般具有堅強的免疫力，即使長(cháng)期處在嚴重疫區，也 不出現感染癥狀�？磥�(lái)不僅對同型病毒具有堅強的免疫力，而且也可能在一定 程度上抵抗異型病毒的感染。奇怪的是這些馬騾的血清大多沒(méi)有明顯的免疫性 能，而人工免疫血清卻有較高的保護力。人工接種嗜內臟性或嗜神經(jīng)性馬瘟病 毒，均可引起對同型同代次病毒的持久免疫力。但是必須指出，馬瘟病毒常在 連續通過(guò)馬體時(shí)發(fā)生抗原變異——型內的抗原變異。故在應用同型不同代次的病 毒攻擊或感染時(shí)，可能出現不抵抗或者抵抗力不高的現象。因在這種病毒，輕 微的抗原變異就已可能相當明顯地影響病毒的免疫原性。�ツ壳爸饕獞�用疫苗預防和控制馬瘟。

馬瘟疫苗有下列各類(lèi)：

�ィ�1）福爾馬林滅活組織疫苗：這是過(guò)去曾經(jīng)用過(guò)的一種疫苗，也是制造方法十 分原始的一種疫苗。取瀕死期典型病馬的脾臟，研磨成乳劑，加入0��2%～0��4%福 爾馬林滅活后，即可在當地直接用作預防接種。這種疫苗目前只在個(gè)別地區用 作緊急預防注射。

�ィ�2）福爾馬林滅活細胞培養苗：先使馬瘟病毒傳代株在猴腎細胞上大量增殖， 隨后在病毒培養液內加入0��3%福爾馬林，32℃處理72小時(shí)，并加入氫氧化鋁佐劑，制成單 價(jià)或多價(jià)疫苗。這種疫苗的優(yōu)點(diǎn)是安全，且能引起一定程度的免疫 力。但用量大（每次10毫升以上），且常需作多次注射。有人應用0��2%～0��4% β�� 丙內酯作滅活劑，據云可以保持更好的免疫性能。

�ィ�3）小鼠化嗜神經(jīng)性弱毒疫苗：是將各型馬瘟病毒連續通過(guò)小鼠腦內傳100代 以上而育成的弱毒疫苗株。非洲地區大多應用由7～8個(gè)血清型混合制成的多價(jià) 疫苗，并已取得較好效果。美國產(chǎn)的9種血清型弱毒疫苗，已在生產(chǎn)中應用。在 以某一血清型為主的地區，可以考慮應用相應的單價(jià)疫苗。這類(lèi)疫苗目前大多 已經(jīng)制成凍干制品，保存和運輸都較方便。多價(jià)疫苗的缺點(diǎn)是免疫效果有時(shí)不 夠穩定。在用血清學(xué)試驗作疫苗接種后的抗體檢測時(shí)，經(jīng)常發(fā)現各型的中和抗 體效價(jià)不一致，某些血清型的中和抗體效價(jià)較高，另一 些血清型的中和抗體效 價(jià)較低甚至缺 如。這可能是毒株間發(fā)生了干擾作用，也可能是其中某幾個(gè)毒株 本身的免疫原性較差的緣故。�ピ隈R瘟流行地區，要求每年接種一次鼠化弱毒疫苗。

�ィ�4）細胞培養弱毒疫苗：是將鼠化弱毒株接種倉鼠腎細胞或猴腎細胞，再經(jīng)適 當選育而成的弱毒株。按其不同的血清型，也可做成多價(jià)凍干疫苗。這種疫 苗已經(jīng)大規模用于南非和中東地區，效果較好。��

（5）雞胚弱毒疫苗：Goldsmit （1968）將弱毒疫苗株接種雞胚，制成雞胚弱毒疫苗。用馬 進(jìn)行免疫保護試驗，效果與鼠腦弱毒疫苗相似，均能抵抗強毒株的攻擊。��

 （6）豚鼠化弱毒疫苗：是將馬瘟病毒連續多代通過(guò)幼豚鼠腦而育成的嗜神經(jīng)性 弱毒疫苗株。據云此株對馬安全，并能引起較好的免疫性，但尚缺乏大量臨床 應用的數據。��

[BT4]8. 診斷�ヱR瘟的典型臨床癥狀和病理剖檢變化，對本病具有一定的診斷價(jià)值。但是確診 必須依靠病毒分離鑒定以及特異性血清學(xué)檢查。特別是在老疫區，或因疫苗注 射而已具有部分免疫力的馬騾，感染發(fā)病時(shí)一般不呈現典型的癥狀和病變，那 就更應進(jìn)行特異性診斷。��

（1）病毒的分離和鑒定 采取發(fā)熱期的病馬血液，加入肝素抗凝，或者剖取瀕 死期動(dòng)物或新鮮尸體的脾臟，于�﹑H7��4��的緩沖液內作成乳劑，腦內接種2～6日齡 小鼠。因為某些病馬的病毒血癥時(shí)間可能很短，因此必須在發(fā)熱初期采血。2～6 日齡乳鼠在接種后5～10天發(fā)病死亡。較大日齡小白鼠的潛伏期為10～15天，病 鼠被毛蓬亂，呈現過(guò)敏狀態(tài)，繼則發(fā)生不全麻痹，最后波及全身，于昏迷狀態(tài) 下死亡。連續通過(guò)鼠腦幾代后，潛伏期明顯縮短（3～5天）。�ソ臃N過(guò)疫苗的馬騾，由于體內存在抗體，發(fā)病時(shí)不易由血液中分離到病毒。有 人建議給水貂作腦內接種，據云對這類(lèi)病例的病毒分離率明顯高于乳鼠分離法 。�ルS后即可進(jìn)行病毒的初步鑒定。由于補體結合試驗呈群特異性，可以檢出各血 清型病毒共有的群特異性抗原，故最適于作病毒的初步鑒定�？捎蒙鲜鲆幝尚� 死亡的乳鼠腦于�﹑H7��4��～7��8的磷酸鹽緩沖鹽水內作成10%乳劑，4℃放置過(guò)夜， 其間定期振蕩，以5 000r/min的速度離心沉淀20分鐘，吸取上清液作為抗原， 與標準陽(yáng)性血清（人工免疫的馬騾、家兔或豚鼠血清）進(jìn)行補體結合試驗。這 類(lèi)鼠腦乳劑通常具有1∶16～1∶32的抗原效價(jià)，同樣制備的健康鼠腦乳劑應為 陰性。��熒光抗體技術(shù)也呈群特異性，可以直接用以檢測細胞培養物中的馬瘟病毒抗原 。也可應用瓊脂擴散試驗進(jìn)行初步鑒定，即用標準陽(yáng)性血清與感染鼠腦或細胞 培養物的超聲波裂解物進(jìn)行瓊脂擴散試驗。�ゲ《狙�清型的鑒定，須用中和試驗以及血凝抑制試驗。�ブ泻驮囼灴稍谌槭蠡蚪M織培養細胞（如BHK��21或Vero細胞）上進(jìn)行，應用由家 兔或豚鼠制備的單型免疫血清，也可用吮乳小鼠腦內接種作中和試驗。具體方 法請參閱本書(shū)第十四章。�ヒ匝�凝抑制試驗進(jìn)行鑒定時(shí)，須先由感染（乳）鼠腦制備血凝抗原，即在鼠腦 懸液中加入0��4%魚(yú)精蛋白，4℃感作10～20小時(shí)，以5 000r/min的速度離心沉淀20 分鐘，吸取上清液應用。先在pH6��4測定其血凝價(jià)，隨后再按常規方法進(jìn)行血凝 抑制試驗。也可應用蔗糖�脖�酮法由感染鼠腦提取血凝抗原，亦即所謂的SA抗原 。具體方法請參閱本書(shū)第十四章。Tewari等建議先用葡聚糖G��200柱層析進(jìn)行初 步提純，隨后再用魚(yú)精蛋白進(jìn)行沉淀，取上清液作為血凝抗原。

�ィ�2）血清學(xué)試驗 包括補體結合試驗、瓊脂擴散試驗、中和試驗和血凝抑制試 驗。�パa體結合試驗：抗原是由感染（乳）鼠腦或細胞培養物制備。馬騾于感染后7～10 天開(kāi)始出現補體結合抗體，于感染后2～6周達最高滴度，此后逐漸下降，約于6 個(gè)月左右消失。�キ傊瑪U散試驗：抗原是由感染（乳）鼠腦或猴腎細胞培養物經(jīng)超聲波裂解后制 備的。馬匹在感染后2周左右，才能出現沉淀抗體，4～6個(gè)月后下降并消失。一 般出現兩條沉淀線(xiàn)。由于可能出現動(dòng)物種間的非特異性沉淀線(xiàn)，因此必須設置 正�？乖�、陽(yáng)性抗原、正常血清和陽(yáng)性血清的多種對照。�パ�凝抑制試驗：在康復馬或免疫馬的血清中存在有型特異性的血凝抑制抗體。 這種抗體的出現時(shí)間較早，約在熱反應后4～5天即可測出，但消失也快，是診 斷馬瘟近期感染的一種常用方法。血凝抑制試驗的關(guān)鍵，是要制備出高質(zhì)量的 血凝抗原。�ブ泻驮囼灒菏氰b定病毒型最常應用的方法�？稍谌槭蠡蚪M織培養細胞上進(jìn)行。 中和抗體的出現早于其他抗體，且持續期長(cháng)。于自然感染馬匹，在熱反應后2～3 天，即可在血清中測出中和抗體。注射鼠化弱毒疫苗的馬匹，通常在接種后6～14 天出現中和抗體，于100天左右達高峰。此后逐漸下降，但在接種后一年，還常 繼續測出低滴度的中和抗體。�� 臨床病例的現癥診斷，也應按雙份血清法進(jìn)行，后份血清比前份血清的效價(jià)提 高4倍以上者具有診斷意義。��ELISA試驗：80年代末建立的競爭ELISA試驗，是敏感而又特異的。該法應用提 純的病毒多肽Vp��7免疫動(dòng)物制備高免血清，效果好，既可用于檢測血清的群 特異性抗體，也可用于直接檢測組織中的抗原。