用靈發(fā)素（LFS ）建立翅子羅漢果組織培養技術(shù)一

錄入時(shí)間:2009-7-2 11:53:03 來(lái)源：青島海博

摘要：目的：建立翅子羅漢果的組織培養技術(shù)；方法：以翅子羅漢果野生植株的單節莖段作外植體，Ms 為塞本培養基，在統一添加NAA0.1 后，再分別添加LFS , BA , KT0.3 進(jìn)行誘導；結果：( 1 ）只有Ms + NAA0.l + us0.3 能誘導腋芽萌發(fā)并建成根苗齊全的再生植株，25d 萌發(fā)率）90 % ；其它培養基只誘導外植體形成大量愈傷組織，腋芽不萌發(fā)；( 2 ）用Ms + LFS0.3 進(jìn)行繼代培養，周期25~ 30d ，增殖倍數3.7 ; ( 3 ）再生植株移栽成活率90 % ~100 ％。結論：在常用的CTKs 中，至今僅發(fā)現LFS能夠誘導翅子羅漢果單節莖段獲得再生植株。
關(guān)鍵詞：靈發(fā)素；翅子羅漢果；瀕危珍稀植物；組織培養；再生植株
LFS是一種微生物來(lái)源的新型植物生長(cháng)調節劑，呈白色針狀結晶，分子式C₁₁H₁₃ O₄N₅。其突出特點(diǎn)是，同時(shí)具有細胞分裂素和生長(cháng)素（Auxin ，如蔡乙酸NAA ，叫噪乙酸IAA 及叫噪丁酸IBA 等）的生物活性。因此，它不僅能誘導和促進(jìn)地上莖、葉器官的分化與生長(cháng)，也能誘導和促進(jìn)地下根器官的分化與生長(cháng)。而常用CTK ( BA , KT 和ZT 等）則被學(xué)術(shù)界公認為，都顯著(zhù)抑制不定根的形成。加之LFS易溶于水，高溫高壓滅菌條件下穩定川，所以很適宜在植物組織培養技術(shù)中應用，并且已經(jīng)獲得了一批頗有價(jià)值的成果。翅子羅漢果與目前大量栽培的普通羅漢果同為羅漢果屬，但屬于不同種。
據鐘仕強介紹，翅子羅漢果具有抗病、抗高溫能力強、生長(cháng)旺盛、果大而多等優(yōu)良性狀，其總糖含量達28 ％左右，亦高于普通羅漢果的26 ％左右。特別值得指出的是，普通羅漢果甜貳的甜度是蔗糖的300 倍左右，就已經(jīng)引起了國內外的廣泛關(guān)注，然而中國科學(xué)院的研究工作者在翅子羅漢果中發(fā)現的另一種甜味貳，命名為翅子羅漢果貳I ，其甜度竟達到蔗糖的560 多倍，因此成為世界上最甜的葫蘆烷甜味劑，開(kāi)發(fā)前景十分誘人。翅子羅漢果1871 年被人們發(fā)現至今已有130 多年，1914 年作為新種正式記載也有90 多年。但是，目前其野生資源幾乎滅絕，非常難覓。雖然關(guān)于普通羅漢果的組培技術(shù)已有不少研究，卻鮮見(jiàn)翅子羅漢果組培技術(shù)的報道。為保護這一瀕危而珍貴的植物種質(zhì)資源，以便日后的研究和開(kāi)發(fā)利用，自20 （瑪年開(kāi)始對翅子羅漢果組培技術(shù)進(jìn)行探索，歷經(jīng)多次失敗之后，最終用LFS成功獲得再生植株，建立了相應的組織培養技術(shù)。
1 材料與方法
1.1 材料
野生翅子羅漢果植株由廣西藥用植物園鐘仕強主任中藥師采自廣西大新縣山林，移栽于廣西大學(xué)農業(yè)教學(xué)科研基地防蟲(chóng)網(wǎng)室。取其新生藤蔓用報紙包裹，外套塑料保鮮袋減少失水。實(shí)驗室內用自來(lái)水沖洗30 min 以上。剪除頂芽和葉片，保留部分葉柄，再剪成單節莖段（長(cháng)2 一3 cm ) ，備用。
所用LFS，BA , KT 和NAA，等生長(cháng)調節劑的來(lái)源，見(jiàn)文獻。
1.2 方法
1.2.1 培養基配制
外植體誘導培養基：為便于直接對比，在擬定外植體誘導培養基配方時(shí)，參考了許鴻源和劉曉燕仁的配方，將3 種細胞分裂素LFS , BA 和KT 的使用濃度都調整為0.3mg/L ，而NAA 保持0.1mg/L 不變：( l ) MS ( ck ) ; ( 2 ) MS + NAA 0.1 ( mg/L ，下同）+ LFS0.3 ; ( 3 ) MS + NAA 0.1 + BA 0.3 ; ( 4 ) MS + NAA 0.1 + KT 0.3 。
繼代與生根培養基：根據本實(shí)驗外植體誘導的結果和許鴻源等的經(jīng)驗，定為（5 ) MS + LFS0.3 。上述各組培養基均添加蔗糖3 % ，瓊脂4.5 g/L , 調pH 至5.8 。

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