禽雙RNA病毒屬（二）

5  病原性�ケ静《镜淖匀凰拗鳛殡u和火雞，其它禽類(lèi)未見(jiàn)感染，雞是唯一自然感染發(fā)病的動(dòng)物。所有品 系的雞均可發(fā)病。3～6周齡的仔雞最易感。年齡較大的雞具有一定抵抗力，小于3周齡的雛 雞感染后會(huì )產(chǎn)生嚴重的免疫抑制。��潛伏期短，人工感染后2～3天出現臨床癥狀。在易感雞群中，初發(fā)的法氏囊病 多呈急性型。通常于感染后第3天開(kāi)始死亡，并于5～7天達最高峰，以后逐漸減 少。本病突出的表現為發(fā)病突然，發(fā)病率高，死亡集中發(fā)生于很短的幾天時(shí)間 內以及雞群的康復較為迅速。病死雞呈現脫水現象，股部和胸部肌肉經(jīng)常有出 血，呈條狀或塊狀。腸粘膜與腺胃有出血，腎臟蒼白腫大。法氏囊是本病毒的 主要靶器官，變化最為明顯。感染初期法氏囊水腫、出血，表面有膠胨狀黃色 滲出液，表面的縱紋變得明顯，顏色由白變成乳白色，至第4天腫脹最大，約較 正常法氏囊大2～3倍，第5天開(kāi)始恢復正常大小，以后逐漸萎縮，到第8日僅為正常大小的1/ 3。病理組織學(xué)變化主要局限于法氏囊、脾臟、胸腺、哈德氏腺和盲腸扁桃體的淋巴結內 ，以髓狀淋巴組織細胞壞死為特征。法氏囊受損最嚴重，感染后第1天就觀(guān)察 到法氏囊濾泡髓質(zhì)區的淋巴細胞壞死、變性。��IBD是高度接觸傳染性的，病毒持續存在于雞舍的環(huán)境中，可通過(guò)直接接觸從雞 傳于雞，或通過(guò)污染病毒的各種媒介物如飼料、飲水、塵土、器具、墊料、人 員衣鞋、昆蟲(chóng)機械等間接傳播，也可能通過(guò)種蛋垂直傳播。將病毒滴入易感雞 的眼內，也易引起感染。常規措施通常不能使病雞舍徹底消毒。�ゲ《局饕�經(jīng)消化道傳入，開(kāi)始在腸道巨噬細胞和淋巴細胞內初步增殖，然后隨 血流移至肝臟和法氏囊，經(jīng)口人工感染后22小時(shí)就能在法氏囊淋巴細胞中檢測 到病毒。定居在法氏囊組織后，病毒大量增殖并釋放到其它組織，產(chǎn)生第二次 病毒血癥。在法氏囊病的早期，病毒存在于除腦以外的絕大多數組織和器官中 ，其中以法氏囊和脾臟的含毒量最高，其次為腎臟。��實(shí)驗感染3～6周齡火雞，僅表現輕微的臨床癥狀，但是法氏囊有病理組織學(xué)變 化，并能分離出ＩＢＤＶ。感染鵪鶉未能獲得成功。

��6.診斷�ジ鶕蘒BD的特征性癥狀和肉眼病變，比較容易地作出初步診斷，但對可疑病例或 混合感染，常需分離和鑒定病毒。��(1) 病原的分離和鑒定�ア� 樣品采集〓通常選擇法氏囊和脾組織。其它器官也含有病毒，但病毒量低， 可能只有在毒血癥時(shí)病毒含量有所增加。在病的早期階段（感染后3～6天），IBDV 能從大多數淋巴組織中分離到，考慮到本病呈急性經(jīng)過(guò)，感染持續期短暫，分 離病毒就應至少采集5個(gè)臨床感染的雞，病料凍結貯存。如果選擇法氏囊分離病 毒，應注意法氏囊可能被呼腸孤病毒或腺病毒等所污染，使得鑒定過(guò)程復雜化 。�ア� 雞胚接種〓最好選擇9～11日齡SPF雞胚，接種CAM。雞胚通常在接種后3～5 天死亡，胚體病變如前述。此法是目前公認的分離病毒的最敏感方法，成功率 高于細胞培養。�ア� 細胞培養〓常用CEF和BGM��70，可產(chǎn)生細胞病變，如將野毒先通過(guò)雞胚適 應后，再接種細胞培養物，則可提高分離率�？紤]到IBDV在B淋巴細胞內復制， 選用來(lái)源于法氏囊的原代細胞或B細胞源的傳代細胞系分離效果好。細胞內增殖 的病毒可用免疫熒光和電鏡方法檢測，這對于IBDV的早期診斷和鑒定有很大價(jià) 值，同時(shí)也可用于鑒定IBDV的血清型。�ゴ送�，還可應用IBDV核酸探針檢測IBDV分離株和直接確定組織內的IBDV。Jackwood 等（1990）報道IBDV探針在斑點(diǎn)雜交中不僅能檢出大約10ng的IBDV RNA，還可 檢測IBDV血清Ⅰ型的5個(gè)不同亞型和2株血清Ⅱ型病毒基因組RNA。��[BT4](2) 免疫學(xué)鑒定�ア� 瓊脂擴散試驗〓此法簡(jiǎn)便快速，在感染后5～6天即能檢測到病毒抗原，取 病雞法氏囊制作懸液（1∶2～5），離心取上清，再用特異的高免血清（單抗） 按瓊擴法常規進(jìn)行。本法亦可用已知抗原測定康復雞群的IBDV群特異性抗體，即 將感染后3～4天的法氏囊勻漿（1∶2）反復凍融（3次）離心后制成診斷抗原， 檢測血清中的抗體。早在感染后7～10天直至感染后1年以上均能測到沉淀抗體 。�ア� 熒光抗體技術(shù)〓此法可快速檢測抗原。取病雞的法氏囊組織作觸片或冰凍切 片，用特異的熒光抗體染色鏡檢。為降低非特異性熒光，可先將熒光抗體用SPF雞 的法氏囊勻漿吸收處理。�ア� ELISA〓雙夾心抗體ELISA檢測IBDV抗原是快速、敏感和特異的血清學(xué)方法 ，若用抗IBDV的單克隆抗體包被酶標板來(lái)捕捉IBDV，則敏感性和特異性更高。 目前，普遍使用ELISA方法評價(jià)雞群內的IBDV抗體，尤其適用于較大規模的血清－ 流行病學(xué)調查。ELISA商品試劑盒具有方便、重復性好、結果一致等優(yōu)點(diǎn)。�ア� 中和試驗〓只有中和試驗能夠鑒定不同的IBDV血清型，區分IBDV分離株之 間的抗原差異。常用細胞適應毒在CEF上進(jìn)行微量中和試驗，即用培養液將待測 血清作2倍稀釋并加到含有培養24小時(shí)融合生長(cháng)的單層CEF的96孔微量細胞板上 ，每孔用1 000個(gè)蝕斑形成單位（pfu）的病毒接種細胞，37℃培養5天。培養后 除去生長(cháng)液，并用10%緩沖福爾馬林沖洗5分鐘，傾去福爾馬林鹽水，細胞用1% 結晶紫進(jìn)行染色。以抑制細胞病變的最高血清稀釋度的倒數來(lái)表示中和效價(jià)。�ア� RNA電泳〓取病變法氏囊或感染雞胚的組織乳劑以及感染細胞培養物，用SDS處理，苯 酚－氯仿抽提后，進(jìn)行電泳，�？娠@出２條清淅的帶。具體方 法參閱本書(shū)第十九章輪狀病毒節。��

7.免疫�ビ捎贗BDV在外界環(huán)境中較為穩定，采取消毒和隔離措施來(lái)控制本病不易達到目 的。主要的防制方法是接種疫苗。有數種弱毒疫苗可供應用，這些疫苗一般分 為高度致弱的“溫和型”疫苗和中等毒力的”中間型“疫苗，后一種疫苗目前 較為常用，因為高度致弱的IBDV毒株，對帶有母源抗體的雛雞，不能很好地誘 導免疫力�？紤]到雞群被動(dòng)免疫水平差異較大，且難以檢測，一般做法是在3周 齡時(shí)給所有的雛雞滴眼或飲水免疫IBDV活疫苗。�ヨb于抗原變異株屢有發(fā)現以及近來(lái)某些國家和地區出現高病原性或超強毒IBDV （vvIBDV），采用變異株的滅活疫苗是可取的。美國等國家已研制出致弱的IBDV 變異株，對雛雞安全，能刺激雞體產(chǎn)生保護性免疫應答，抵抗變異株和標準的 血清Ⅰ型IBDV野毒的攻擊。�ビ陕腰S囊獲得的母源抗體能夠保護雛雞抵抗IBDV的早期感染和防止由本病毒引 起的免疫抑制�？笽BDV的母源抗體半衰期是3～5天。因此，如果了解雛雞的抗 體滴度，就能預測雞對IBDV的易感年齡。通常是給母雞注射油乳劑滅活疫苗，刺 激機體產(chǎn)生高水平的母源免疫力，以使保護雛雞達4～5周。而活疫苗免疫種雞 ，產(chǎn)生的母源免疫力只能保護雛雞1～3周，同時(shí)也要考慮到IBDV的獲得性免疫 能干擾主動(dòng)免疫反應。�ブ档米⒁獾氖荌BDV感染的免疫抑制作用。Allan等和Faragher等首先報道了IBDV感染的 免疫抑制作用。受到感染的1日齡雛雞對新城疫病毒 的抗體反應抑制作用最大，IBDV感染7日齡雛雞后呈現中度的抑制。免疫抑制不 僅表現為對疫苗的反應，而且對多種疾病如包涵體肝炎、球蟲(chóng)病、馬立克氏病 、出血性再生障礙性貧血癥和壞疽性皮炎、傳染性喉氣管炎、傳染性支氣管炎 、雞傳染性貧血因子、沙門(mén)氏菌病和大腸桿菌病等更易感。因此，在使用中等 毒力的疫苗時(shí)，應避免在幼齡期接種高度易感的雞群。��熒光抗體檢測證實(shí)病毒主要在法氏囊的不成熟或前體B淋巴細胞內復制，而在胸 腺、脾、淋巴結的淋巴細胞內增殖不明顯。IBDV的感染，損害體液和局部免疫系 統，從而導致以體液免疫抑制為主的免疫失敗。�� 由于Vp��2在誘導產(chǎn)生保護性免疫應答方面起著(zhù)十分重要的作用，為ＩＢＤＶ 基因工程疫苗的開(kāi)發(fā)展示了廣泛的前景。已建立的Vp��2單克隆抗體能被動(dòng)地 保護雛雞。將編碼Vp��2的cDNA序列插入到禽痘病毒基因組中，用來(lái)免疫 幼雞，當遇到強毒ＩＢＤＶ攻擊時(shí)，Vp��2在體內的表達能保護幼雞免于死亡 ，但不能保護法氏囊不受損害，Vp��2亦能在酵母細胞表達。