水生雙RNA病毒屬（Aquabirnavirus）
同義名：雙RNA病毒屬（\%Birnavirus\%）[BT(2+1]傳染性胰壞死病毒（Infectious pancreasic necrosis virus）,同義名：鱒魚(yú)傳染性胰腺壞死病毒（Infectious pancreas necrosis virus of trout）〖HT5SS〗傳染性胰壞死病是鮭科魚(yú)的一種高度接觸傳染性的急性病毒性疾病，主要發(fā)生 于人工養殖的虹鱒魚(yú)場(chǎng)，20周齡以?xún)龋ㄒ恢搁L(cháng)，開(kāi)食后不久）的虹鱒魚(yú)苗最為 易感。病魚(yú)典型癥狀為游動(dòng)異常，沿身體縱軸劇烈轉圈，此后可能因衰竭而臥 底不起，不久死亡。病魚(yú)體色深暗，腹部膨脹，眼球突出，皮下出血，死亡率 在10%～90%之間。剖檢見(jiàn)胃及前腸中有粘稠的牛奶樣內容物，并常見(jiàn)有出血斑 。病理組織學(xué)變化主要是胰腺組織壞死，有時(shí)波及附近的脂肪組織，在變性的 胰腺腺泡組織內，可見(jiàn)圓形或卵圓形的胞漿內包涵體。本病最早于1941年在北美發(fā)現，1960年證實(shí)其病原為傳染性胰壞死病毒（IPNV ）。此后傳至歐洲。目前除澳大利亞和新西蘭外，其它各產(chǎn)魚(yú)國均有發(fā)現，是 最重要的魚(yú)病之一，許多國家列為均將本病魚(yú)類(lèi)進(jìn)口的重點(diǎn)檢疫項目。我國山西從日本 進(jìn)口的虹鱒魚(yú)中也發(fā)生了此病，在臺灣省從日本鰻及泥鰍分離到的適應于30℃ 水溫的毒株，對非鮭科魚(yú)有致病性，令人關(guān)注。
1 形態(tài)病毒粒子為無(wú)囊膜的廿面體，直徑約60nm。在感染細胞的超薄切片中，核心的 直徑為45nm。 [BT4]2 理化特性具有4種結構多肽Vp1、Vp2、Vp3、Vp4，分子量分別為94kDa、54kDa 、31kDa和29kDa。Vp1是一種次要蛋白，既能以游離蛋白形式又能以結合蛋白 形式存在；Vp2是衣殼蛋白的主要成分，為糖蛋白；Vp4是Vp3的裂 解產(chǎn)物，而傳染性法氏囊病病毒和果蠅X病毒的Vp4是獨特存在的多肽�；� 因組每個(gè)節段RNA都與Vp1相結合，因此每個(gè)病毒都有4個(gè)分子量為94kDa的結 合蛋白�；蚬澏蜛為3 092bp，內含一個(gè)大的開(kāi)放閱讀框架（ORF），編碼一個(gè)104kDa 的多聚蛋白（polyprotein），其排列順序為5′前Vp2(62kDa)NS(27kDa)Vp33′，以后再共轉譯成二個(gè)片段，即前Vp2和NS－Vp3。在 病毒成熟過(guò)程中，前Vp2再進(jìn)一步裂解成Vp2�，F已證實(shí)，NS多肽的羧基端 含有病毒蛋白酶的活性位點(diǎn)�；蚬澏蜝為2 784bp，編碼Vp1和一假定的RNA 聚合酶。病毒對環(huán)境因素的抵抗力極強，是已知魚(yú)類(lèi)病毒中最穩定的。在水中存活時(shí)間 可超過(guò)230天，在粘液中超過(guò)210天，在50%甘油中4℃存活2年半。在4℃水中毒 力至少可維持 5～6個(gè)月，在4℃干燥環(huán)境中殘余毒力可維持4周以上。在10℃的 自來(lái)水中可存活7個(gè)月以上，60℃加溫一小時(shí)不能使其完全滅活。未經(jīng)處理的海 水17天后即不再能檢出病毒，但上述的水如經(jīng)過(guò)濾或高壓處理，病毒存活的時(shí) 間將延長(cháng)4倍。臭氧在軟水中30秒鐘可滅活病毒，在硬水中則需10分鐘。30%福 爾馬林、2%燒堿、有機碘、紫外線(xiàn)及γ射線(xiàn)可迅速滅活病毒。3 抗原性根據抗原性的差異，過(guò)去將傳染性胰壞死病毒分為3個(gè)亞型，即IPNVSp、IPNVAb 及IPNVVR299，前二株作為歐洲毒株的代表，后一株作為美洲株的代表。1985 年Hill將所報道的毒株重新分類(lèi)，按其血清學(xué)關(guān)系分為兩組，1組有9個(gè)血清亞型，2 組有1個(gè)亞型，見(jiàn)表20-2，Chrisfie等（1988）報道1組的另一新亞型IPNVN1。已在實(shí)驗室內證實(shí)IPNV血清型間的基因片段重組。毒株間的毒力亦有較大的差異，在自然條件下IPNVSp株的毒力較強，經(jīng)細胞 培養傳代可致弱，最終變?yōu)闊o(wú)毒株。[FQ(15。20,Y-WZ][HT5”H][JZ]表20-2〓IPNV的血清學(xué)分型[HT6SS][HJ 2][BG(!][BHDFG2,WK6,K9,K6W]血清型[]代表宿主[]流行區域[BHDG21]1組IPNVSpIPNVAbIPNVHeIPNVTeIPNVWBIPNVJaIPNVC 1IPNVC2IPNVC3IPNVN12組IPNVTV[]虹鱒虹鱒狗魚(yú)櫻蛤虹鱒美洲紅點(diǎn)鮭,虹鱒鮭虹鱒歐鱒鮭 櫻蛤、鯉[]歐洲、北美歐洲、亞洲歐洲歐洲北美、亞洲加拿大 加拿大加拿大加拿大歐洲歐洲[BG)F][HT][HJ][FQ)]IPNV的Vp2與中和抗體產(chǎn)生有關(guān)，針對Vp3的單克隆抗體不能 中和病毒粒子的感染性。IPNV中的一些分離株（如IPNVSp、IPNVAb及IPNVWB ）在pH60的條件下能凝集某些品系小鼠（BALB/C）的紅細胞。
4 培養病毒易于適應新鰭類(lèi)魚(yú)的傳代細胞培養物，最常用的易感細胞為CHSE214及RTG2 細胞系，均可產(chǎn)生細胞病變。在RTG2還可形成清晰易辨的蝕斑，特征為死亡細 胞皺縮拉長(cháng)成網(wǎng)狀。較新的細胞系AS及PG也很常用，FHM或BF2雖也可用，但有 時(shí)不產(chǎn)生細胞病變。培養溫度4～30℃，一般用20℃，復制周期為16～20小時(shí)，通 常在48小時(shí)培養后出現以細胞崩解為特點(diǎn)的細胞病變。如用26℃培養，病毒 增殖加快，在9小時(shí)內即可出現細胞病變。IPNVSp株在RTG2傳代的過(guò)程中毒力 減弱，蝕斑從05mm增大至2mm，后者成為無(wú)毒株。來(lái)源于兩棲類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)或哺乳 動(dòng)物的細胞不能支持IPNV增殖。
5 病原性病毒主要危害鮭科魚(yú)，20周齡的虹鱒魚(yú)最為易感。成年鮭科魚(yú)感染后常無(wú)癥狀 ，成為帶毒者，此種魚(yú)在疫區占有相當比例，終身排毒。主要經(jīng)糞、精液或卵 ，尿也有可能。糞的含毒量很大，污染池水中的病毒高達每升105 TCID50 。非鮭科魚(yú)及貝類(lèi)可能作為病毒貯主，但從它們體內所分離到的毒株對虹鱒 多不致病。水溫對魚(yú)病來(lái)說(shuō)至關(guān)重要，已證實(shí)感染IPNV的虹鱒魚(yú)苗在6℃下死亡率要大大低 于在10℃的死亡率，而在16℃時(shí)則完全沒(méi)有損失。河鱒也有類(lèi)似的情況，在10 ℃時(shí)感染IPNV的死亡率為74%，15℃時(shí)為46%，而在45℃時(shí)所有魚(yú)都能耐過(guò) ，這是因為15℃是魚(yú)體免疫防衛的最佳溫度，而在45℃則抑制了病毒的復制。病毒經(jīng)水平和垂直途徑傳播，潛伏期短，典型者只需3～5天，最初入侵的門(mén)戶(hù) 為消化道或鰓。病毒對胰腺、性腺及腎組織有親嗜性。近年來(lái)研究發(fā)現這種病毒有非常廣泛的感染譜。據統計，目前已發(fā)現本病毒感 染的動(dòng)物至少有1種環(huán)口動(dòng)物、37種硬骨魚(yú)、6種貝類(lèi)、2種蝸牛及3種蝦。不僅 能感染淡水魚(yú)，也能感染咸水魚(yú)；除冷水魚(yú)外，在30℃高溫生長(cháng)的日本鰻及泥 鰍也發(fā)現有感染。[BT4]6 診斷臨床上病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）、傳染性造血器官壞死癥病毒（IHNV ）都能感染虹鱒等鮭科魚(yú)，引起與傳染性胰壞死相似的癥狀，確診必須依靠病 原分離與鑒定或血清學(xué)檢查。[BT4](1) 病原分離與鑒定采集病魚(yú)的臟器、糞液或卵液，供診斷用。帶毒魚(yú)則多采集其糞、精液或 卵液。臟器的含毒量以腎最高，其次為胃、肝和脾，肌肉的含毒量最低。臟器 制成勻漿后，再作1∶10或更高稀釋后才可接種細胞分離病毒；糞至少應作1∶20 至1∶50稀釋?zhuān)越档推涠拘�；卵液或精液不必稀釋可直接接種細胞。分離病毒首選的敏感細胞為CHSE214或RTG2，置20℃孵育，5天后如仍不出現 細胞病變則盲傳數代，即可能產(chǎn)生明顯的病變，進(jìn)一步用熒光抗體、ELISA或中 和試驗確診。有報道，直接將病魚(yú)或帶毒魚(yú)的內臟用胰酶消化，或由帶毒魚(yú)分離的白細胞， 與RTG2同步混合培養，分離效果最好，此法比直接接種腎組織懸液敏感2倍。[HT5H](2) 血清學(xué)檢測[HT5SS]最常用的方法為中和試驗、熒光抗體法、ELISA及SPA協(xié)同凝集試驗。中和試驗 鑒定分離株應采用IPNV多價(jià)抗血清。進(jìn)一步鑒定分離 株的血清型則需用型特異血清作中和試驗。熒光抗體可用直接法或間接法檢測 抗原以及培養的感染細胞、感染魚(yú)的組織材料等。ELISA法適用于流行期大 量樣本抗原的檢測，檢測的靈敏度為1035～1055TCID5０。SPA 致敏IPNV抗血清后，作凝集試驗能直接快速地檢測樣品材料中的病毒。IPNV抗體檢測缺乏實(shí)際意義，一方面由于耐過(guò)IPNV感染的虹鱒血清內的抗體可 持續數年，另一方面IPNV的帶毒者不含或只含滴度很低的抗體。此外，正常虹 鱒血清中還存在非特異的抗病毒成份，即使稀釋至1∶5000仍能中和IPNV細胞適 應毒，所以在大多數情況下難以判斷抗體的水平及其意義。[BT4]7 免疫人工感染的虹鱒在10℃水溫的環(huán)境中約30天后產(chǎn)生IPNV中和抗體，抗體為類(lèi)似IgM 的四聚體球蛋白，在12～14周后達最高滴度，此后長(cháng)期存在，可持續數年，但 是中和抗體的真正意義尚不完全清楚。不同亞型之間沒(méi)有交叉免疫作用，例如 耐過(guò)IPNVAb感染的虹鱒對IPNVSp毒株仍易感。免疫可以被動(dòng)傳遞，但似不存在母 源抗體。在正常虹鱒血清內還存在一種能中和IPNV的蛋白[CD2]6S因子，它與抗體不同，被 認為是非特異性抗病毒因子。免疫預防尚處于試驗階段。發(fā)病魚(yú)池可用有機碘作消毒劑；降低水溫，有時(shí)也 可見(jiàn)效。
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