運用動(dòng)物接種或者雞胚接種的方法分離病毒

第一 獲取病毒分離樣品，這個(gè)要求比較高，采集后如果不能立即操作則必須低溫保存，并盡快送實(shí)驗室操作。另外也可以冷凍保存，一般情況下病毒是不容易凍死的。當然某些特殊病毒除外，這需要查閱相關(guān)資料。

第二 病毒分離操作，將獲取病樣研磨，并凍融至少一次，當然研磨過(guò)程中必須低溫。同時(shí)研磨應充分，在研磨時(shí)可以加入生理鹽水或PBS或者直接加細胞培養液，研磨完全后凍融一到三次，凍融的目的是為了讓細胞完全破裂將細胞內的病毒釋放到溶液中。然后低速離心，取上清用0.22微米的濾膜過(guò)濾，去過(guò)濾后的液體接種細胞。此時(shí)須注意，并不是所有病毒接種是都需要讓細胞完全長(cháng)滿(mǎn)細胞瓶，一般是不能產(chǎn)生細胞病的病毒最好在細胞長(cháng)到40%左右接種，而能產(chǎn)生細胞病變的則需要完全長(cháng)滿(mǎn)細胞瓶以后再接種病毒。接種過(guò)程中為避免污染可以加入雙抗，或者其他抗生素。

第三 接種后觀(guān)察，某些能產(chǎn)生細胞病變的病毒很容易觀(guān)察，直接在顯微鏡下就能看是否分離成功；如果病毒不產(chǎn)生細胞病變，則需要用其他的方法來(lái)檢測，比如可用熒光抗體染色、PCR或者其他方法。不過(guò)大部分情況下第一代都不容易看到或者效果不好，這時(shí)你可以再傳幾代試試。如果再傳四~五代以后都沒(méi)有的話(huà)，那恭喜你，你失敗了，或者你的方法有問(wèn)題，或者根本就沒(méi)有你要分離的病毒，或者在分離過(guò)程中你的病毒就已經(jīng)死了。

用細胞分離病毒大概就是這個(gè)過(guò)程，當然某些病毒可能還沒(méi)有相應的傳代或者原代細胞，如果要分離就只能用易感動(dòng)物了，操作都是相似的，無(wú)非都是采樣、樣品處理、接種、接種后檢測觀(guān)察、收集病毒而已。上面說(shuō)到的方法都是從動(dòng)物組織中分離，當然如果不是組織，比如你要從糞便或者尿液或取的拭子上分離，則可直接將其用生理鹽水、PBS或細胞培養液稀釋?zhuān)ㄒ�盡量搖勻如果是拭子的話(huà)應多擠壓搖勻）然后離心取上清過(guò)濾接種細胞就可以了。

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