食品平板菌落計數

1 培養基和試劑

平板計數瓊脂、75%乙醇、磷酸鹽緩沖稀釋液

2 操作程序

2.1 樣品制備

2.1.1 以無(wú)菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內。如有包裝，則用75%乙醇在包裝開(kāi)口處擦拭后取樣。

2.1.2 制備樣品勻液

以無(wú)菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內，于8000r/min均質(zhì)1-2min，制成1：10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過(guò)2min，應在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。

2.2 稀釋樣品勻液

2.2.1 用10ml滅菌吸管準確吸取1：10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：100的樣品勻液。振搖時(shí)，幅度為30cm，7s內振搖25次。從容器中吸取樣品勻液和以后的稀釋操作中，吸管尖不要碰著(zhù)瓶口。吸入的液體應先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端離開(kāi)液面并貼在容器內壁將液體調至所要求的刻度。

2.3 平板接種

2.3.1 對于每個(gè)樣品，選用合適的三個(gè)連續稀釋度的樣品液進(jìn)行平板計數。

2.3.2 分別用滅菌吸管吸取1ml樣品液放入作了適宜標志的平皿內。每個(gè)稀釋度的樣品液用兩個(gè)平皿。

2.3.3 分別加12-15ml平板計數瓊脂（約45℃左右）到平皿內。立即將平皿內的樣品液和瓊脂培養基充分混合。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。同時(shí)將平板計數瓊脂傾入加有1ml稀釋劑的另一滅菌平皿作空白對照。將樣品液加入平皿后應立即傾注瓊脂培養基，每個(gè)樣品從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過(guò)20min。

2.4 培養

待瓊脂凝固后將平皿翻轉，立即放進(jìn)36±1℃的恒溫培養箱培養48±2h。培養箱應保持一定的濕度，經(jīng)48h培養的瓊脂培養基的失重不得超過(guò)15%。

2.5 菌落計數和記錄

2.5.1 培養后，立即計數每個(gè)平板上的菌落數。25-250個(gè)菌落為合適范圍。如不能立即計數，應將平板存放于0-4℃，但不得超過(guò)24h。

2.5.2 操作者對同一平板復核自己的計數結果，其差異應在5%之內，而其他人對這一平板重復計數，其差異應在10%這內。否則，應找出原因，加以校正。

2.6 計算和記錄數字

適宜稀釋度的兩個(gè)平板的菌落數平均值或兩個(gè)稀釋度的平板菌落數平均值乘以相應稀釋度倍數計算出每克（毫升）樣品中平板菌落數。

記錄時(shí)，只有在換算到每克（毫升）樣品中平板菌落數時(shí)，才能定下兩位有效數字，第三位數字采用四舍五入的方法記錄。也可將樣品的平板菌落數記錄為10的指數形式。

3 結果報告

報告每克（毫升）樣品中平板菌落數或估計的平板菌落數。

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