先將病毒懸液對緩沖液透析。根據病毒的種類(lèi)不同,選擇適當的緩沖液,但離子強度不能超過(guò)03mol/L以上。病毒粒子依據其所攜帶的電荷,在電場(chǎng)中或向正極,或向負極移動(dòng),因此電泳結束后,分段收集病毒區帶部分,就能達到提純的目的。 Polson設計了特殊的U形電泳管,進(jìn)行了脊髓灰質(zhì)炎病毒的大量精制。本法包括密度梯度電泳和pH梯度電泳等,后者又稱(chēng)為等電聚焦電泳。[HT5”SS][JZ]圖13-1〓Polson]U形電泳管[JZ]A,B電極槽;C電泳管;D側管;E毛細漏斗;FU形側管;G節門(mén)活塞]。[HT5SS] 圖中C為梯度柱即電泳管,容積為110~220ml,外面為冷凝套管,必]要時(shí)可用流水冷卻。梯度溶液經(jīng)常用0~40%蔗糖作為梯度介質(zhì)。A和B為電極槽,D為側管,E]為毛細漏斗,F為U形管另一側,裝入緩沖液,G為節門(mén)活塞。 從毛細管E小心注入緩沖液配制的蔗糖濃度梯度溶液(此時(shí)活塞G開(kāi)放),密度低者在上,密度高者在下。于兩側電極槽中只加入緩沖液。然后將濃縮的病毒樣品懸浮于40%蔗糖溶液中,或向病毒懸液中加入固體蔗糖,使樣品中最終含蔗糖濃度約為37%,并在樣品中加入適量酚紅作指示劑。此后用注射器通過(guò)膠管從毛細管E注入2ml樣品,于注入口附近形成樣品帶。加完樣品后通電,依據病毒粒子所攜帶的電荷而在電泳管內移動(dòng)。電泳完畢后由側管D分段取樣,測定各管中蛋白含量和病毒滴度或抗1*ヒ話(huà)愕牡纈痙ê萇儆糜詿罅恐票,因为道i競芤資共《鏡鞍酌鴰,该方法主要应用诱E《鏡鞍椎姆治鲇爰。应用最多的是SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法。7泳法。
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