東方百合莖尖組培技術(shù)研究
錄入時(shí)間:2009-6-24 9:58:45
來(lái)源：青島海博
摘要【目的〕 研究東方百合索蚌、元帥、西伯利亞莖尖分生組織分化，生產(chǎn)脫毒種苗�！� 方法】 利用MS 培養基和外源激素，對東方百合品種進(jìn)行莖尖組織培養�！窘Y果】鮮片誘導小仔球的最適培養基為Ms 十6 - BA 1.0mg/L 十NAA 0.2mg/L 。莖尖誘導和分化的最適培養基為MS + 6 – BA1.0mg/L + NAA 0.5mg/L 。［結論〕 在百合種球產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中，該方法是獲得百合復壯原種的主要手段。
關(guān)鍵詞：東方百合；鱗莖；莖尖培養；MS 培養基
東方百合在我國不少地方被引種栽培，在切花與盆花繁殖中，主要利用無(wú)性繁殖產(chǎn)生種球。由于長(cháng)期使用營(yíng)養體繁殖，東方百合的病毒感染程度很高，因而經(jīng)常發(fā)生種球退化現象，嚴重影響了切花與盆花質(zhì)量。目前，利用百合鱗片、胚等不同外植體進(jìn)行組培分化出的試管苗，可以提高百合的繁殖系數，達到擴繁的目的。除了誘導不定芽外，還有誘導小鱗莖的報道叫。百合組培脫毒常用的外植體是百合莖尖，多數利用鱗片不定芽的莖尖作繁殖材料。1 個(gè)百合莖尖經(jīng)初代培養可以分化出6 一10 個(gè)不定芽。再經(jīng)繼代培養，每個(gè)芽加d 左右又可分化出9 一10 個(gè)小芽。該方法在百合種球產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中可以用于種球復壯，是獲得復壯原種的主要手段。趙慶芳等對東方百合組培快繁技術(shù)進(jìn)行了研究，但未涉及莖尖培養脫毒。筆者研究了東方百合莖尖的組培技術(shù)，旨在為規�；a(chǎn)東方百合脫毒苗提供參考。
1 材料與方法
1.1 供試材料從江蘇省球根花卉種質(zhì)資源基因庫（蘇州農業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園藝中心球根花卉種植圃）采集健壯的東方百合品種索蚌、元帥、西伯利亞植株的種球。
1.2 方法
1.2.1 鱗片消毒和接種。先剝掉種球外部已壞死或病菌感染嚴重的鱗片，然后取種球外面幾層鱗片，用洗衣粉加水攪動(dòng)洗滌10 min ，流水條件下沖洗2h ，晾干后放置備用。將清洗好的鱗片置于75 ％的酒精溶液中消毒0.5 min ，用無(wú)菌水沖洗1 次，再用0.1 ％升汞溶液消毒10 min ，無(wú)菌水沖洗5 次，用滅菌濾紙吸干水分。將消毒鱗片切成5mm2 大小，凸面朝上插人培養基，每個(gè)培養瓶接種1 個(gè)外植體，每種培養基接種50 份，進(jìn)行初代培養。
1.2.2 不同激素組合對不同百合品種鱗片誘導小仔球形成的影響。設計的接種用MS 培養基及激素組合。培養基PH值為5.6 一5.8 ，蔗糖濃度為30g/ L ，培養溫度（25 士2 ）℃ ，光照強度1500~2000lx ，每天照光16h 。培養一段時(shí)間后，定期觀(guān)察接種到上述不同種類(lèi)培養基上的鱗片分化仔球的情況，記錄仔球分化數和直徑，確定最適培養基用于莖尖誘導小仔球的繼代培養。
1.2.3 不同激素組合對不同大小的莖尖分生組織誘導分化的影響。取經(jīng)過(guò)初代培養的小仔球，在解剖鏡下切取長(cháng)度為0.2mm以下、0.2 一0.5mm及0.5 mm以上的3 種莖尖進(jìn)行培養。根據上述鱗片分化仔球的試驗結果，設計莖尖接種的培養基及激素組合培養基聲值為5.6 一5.8 ，蔗糖濃度30g/L ，培養溫度（25 士2 ）℃ ，光照強度1500一2000lx ，每天照光16h 。培養一段時(shí)間后，定期觀(guān)察莖尖分生組織誘導分化的情況，記錄生長(cháng)點(diǎn)死亡數、形成明顯愈傷組織的莖尖數、不定芽產(chǎn)生的莖尖數、平均每莖尖產(chǎn)生的不定芽數。
2 結果與分析
2.1 不同激素組合對不同百合品種鱗片誘導小仔球的影響3 個(gè)品種外植體塊分別接種到4 種培養基上培養46d 后，觀(guān)察統計不同培養基對仔球再分化的影響。由表1 可知：在② 號培養基中，索蚌仔球的每鱗片仔球分化平均數最高，仔球的平均直徑雖相對較小，但適合提高仔球的繁殖系數；在① 號培養基中，仔球的每鱗片仔球分化平均數最低，有85 % 的鱗片形成明顯的愈傷組織，說(shuō)明有利于愈傷組織的誘導；在④ 號培養基中，形成的小仔球較大，但數量少；③ 號培養基中的小仔球數量和大小介于培養基② 和④ 之間，為誘導小仔球最適培養基。由表1 還可知，③ 號培養基誘導元帥小仔球的效果同誘導索蚌情況類(lèi)似，為最適培養基，② 和③ 號差別球的效果最好。經(jīng)比較可知，3 個(gè)品種分化程度差別不大，索較小，④ 和① 號不利于繁殖；② 號培養基誘導西伯利亞小仔蚌分化最好，西伯利亞分化最差。
3 小結與討論
索蚌和元帥分化鱗片誘導小仔球的最適培養基為MS + 6 一BA10mg/L + NAAO.2mg/L ，西伯利亞為Ms 十6 - BA2.0mg/l＋NAA 0.2mg/L ；莖尖誘導和分化的最適培養基都為MS+ 6 一BA 1.0mg/L + NAA0.5mg/L。
大量文獻指出，一定范圍內莖尖越小，誘導的愈傷組織及不定芽數量越少，但脫毒質(zhì)量越高。該試驗利用鱗片和0.5mm以下的莖尖對東方百合進(jìn)行離體培養，通過(guò)脫分化產(chǎn)生愈傷組織，或直接產(chǎn)生不定芽，建立了無(wú)性繁殖系。試驗中，先用鱗片誘導分化一定量的無(wú)菌不定芽，然后再利用無(wú)菌不定芽剝取莖尖，比直接用帶菌鱗莖剝取莖尖降低了污染率，提高了成活率且節省了材料，但脫毒效果需進(jìn)一步研究。
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