1.玻璃器皿〖HT〗組織培養用的玻璃器皿要求比較嚴格,要用耐酸、耐熱和透明度強的中性硬質(zhì)玻璃,尤其是培養組織細胞用的瓶子,更應注意質(zhì)量,而且表面應平坦光滑,以利于細胞貼壁增殖和觀(guān)察。用過(guò)的玻璃器皿用清水沖洗后,放在以?xún)?yōu)質(zhì)洗衣粉配成的1%水溶液內蒸煮半小時(shí),隨后洗刷,并用清水和雙餾水分別沖洗5～6遍以上,再浸泡在雙餾水中1天以上。此后撈出,并用去離子水沖洗3～4遍以后,晾干或烤干,等待包扎和滅菌。新購的玻璃器皿,在清除污物和晾干后,浸泡于硫酸-重鉻酸鉀清洗液內1天以上,撈出,用清水沖洗后,再按上述方法洗刷,沖凈。帶毒的玻璃器皿需先浸泡于5%來(lái)蘇液或1%鹽酸溶液(依病毒種類(lèi)而定)中1天以上或高壓消毒,此后再按上法洗刷和沖凈。洗刷晾干的玻璃器皿,經(jīng)妥善包裝后,以160～170℃干熱2小時(shí)的方法滅菌。
2.塑料制品〖HT〗細胞培養瓶(管、板)的塑料化,已是必然的發(fā)展趨勢。用于組織培養的塑料制品多以?xún)?yōu)質(zhì)聚苯乙烯為原料,隨用途制成各種不同的形狀和規格,其成品均經(jīng)無(wú)菌包裝,工作時(shí)可直接啟封使用,既方便又省力。通常這些塑料制品多為一次性使用,但為了節約也可重復利用。用過(guò)的染毒培養板,通常浸泡于5%甲醛溶液中過(guò)夜消毒。塑料制品的洗刷方法與玻璃制品相同,但滅菌方法不同。即將清洗晾干后的器皿,浸入細胞培養用水配制的70%濃度的高純度乙醇溶液中,至少浸泡24小時(shí),臨用前撈出,甩凈培養瓶?jì)鹊臍堃?包以滅菌的牛皮紙后,置37℃溫箱內,待其完全干燥后即可使用。這種滅菌方法并不十分確實(shí),有時(shí)出現污染。培養板(皿)置于紫外燈下(距離20～30cm)照射消毒,時(shí)間為05～1小時(shí),照射后即刻使用。
3.橡皮制品〖HT〗應選用對細胞毒性較小的軟質(zhì)橡皮管和橡皮塞。新購的橡皮制品先在2%的氫氧化鈉溶液內煮15分鐘,以自來(lái)水沖洗后再用4%的鹽酸溶液煮15分鐘。橡皮管在煮時(shí)務(wù)使管內不含氣泡。用自來(lái)水和雙餾水分別沖冼5～7遍后再浸泡在雙餾水中1天以上,隨后撈出,用去離子水沖洗2～3遍后,晾干包裝。15磅高壓滅菌20分鐘。用過(guò)的橡皮制品先經(jīng)高壓或煮沸1小時(shí)滅菌,隨后在以?xún)?yōu)質(zhì)洗衣粉配成的1%水溶液內煮半小時(shí),再用刷子刷凈,自來(lái)水沖冼數遍后用雙餾水沖冼1遍,并于雙餾水中浸泡1天以上,隨后撈出,用去離子水沖洗2～3遍后,如上晾干包裝和滅菌。
4.濾器〖HT〗常用的有蔡氏濾器、玻璃濾器和微孔濾膜。(1)蔡氏濾器:由石棉板制成,夾于金屬器中使用。一般可分為大孔徑的K型,用于去除較大的顆粒和雜質(zhì);孔徑較小的EK型則用以除菌。這種濾器適于濾過(guò)大量樣品,先用K型濾過(guò)澄清,后用EK型濾過(guò)除菌,以免堵塞濾板。(2)玻璃濾器:系用均一的玻璃粉末燒結而成的多孔性濾板。國內產(chǎn)品按孔徑大小分為G1、G2、G3、G4、G5和G6等幾型。G1～G4型的孔徑為5～200μm,G5型的孔徑為15～25μm,G6型的孔徑在15μm以下。上述型號大致相當于國外的EC(170～220μm)、C(40～60μm)、M(10～15μm)、F(4～55μm)、VF(2～25μm)、UF(09～14μm)。通常應用G1～G4型作初濾澄清之用,G5型可部分除菌,G6型則作過(guò)濾除菌用。玻璃濾器最常用于培養液的過(guò)濾除菌。新購置的玻璃濾器先用清水洗凈。待干后,于濾器的玻璃斗內裝滿(mǎn)硫酸－重鉻酸鉀清洗液,下接濾瓶,讓清洗液自然滴落至盡,隨后加入1mol/LNaOH液,也任其自然滴落。此后用餾水充分沖洗后,再裝滿(mǎn)餾水,并在下面的濾瓶上接抽氣機,造成負壓使餾水不斷通過(guò)濾板。隨時(shí)補加餾水,約5～6次。最后再加三餾水或去離子水,也用負壓抽濾。測定濾液的pH,直至濾出的餾水的pH與加入時(shí)的餾水的pH相同。此時(shí)即可晾干包裝,并高壓滅菌。(3)微孔濾膜:系用醋酸纖維酯和硝酸纖維酯的混合物制成的薄膜,具有025μm至10μm不同的孔徑。近年上海新亞凈化器械廠(chǎng)已生產(chǎn)出合格的孔徑02、03、045、065、080、12μm的多種濾膜,其直徑有25～180mm多種規格。除菌過(guò)濾可用孔徑02μm的薄膜。大孔徑濾膜可用于澄清。微孔濾膜安裝在特制的過(guò)濾器中使用,篩板的孔徑不得超過(guò)08mm。小量液體的除菌過(guò)濾,可用連接于注射器上的特殊小型濾膜過(guò)濾裝置,包裝滅菌后即可使用,極為方便適用。(4)濾器清洗法:用過(guò)的濾器必須立即處理。如果沾有傳染性物質(zhì),應將濾器和濾板煮沸或浸泡于消毒液內消毒(石棉板和濾膜在消毒處理后即行廢棄),再經(jīng)清洗,包裝和滅菌后備用。玻璃濾器用過(guò)后,先用含1%-2%硝酸鈉比重為184的濃硫酸溶液抽洗數分鐘,再用餾水抽洗,然后用1∶1氨水溶液抽洗,以中和其酸性,最后用餾水徹底抽洗。當濾器沾污較多蛋白質(zhì)時(shí),應在清洗前先置于pH85胰蛋白酶溶液中浸泡,在37℃下消化24小時(shí)后,再行抽洗。
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