組織培養,原來(lái)是指動(dòng)物或植物組織小塊的體外培 養。這個(gè)名稱(chēng)現在用以泛指體外的組織、器官和細胞培養,是分離和培養病毒以及進(jìn)行病毒 學(xué)實(shí)驗研究的簡(jiǎn)便而有效的工具和手段。病毒在細胞內的增殖及其對細胞的作用,可以根據 細胞病變、細胞培養物內出現血凝素或其他病毒抗原、紅細胞吸附現象以及通過(guò)對“指示病 毒”的干擾等方法加以識別。近年來(lái),許多新的動(dòng)物病毒,就是通過(guò)組織培養方法而被發(fā)現。 生產(chǎn)病毒抗原以及制造病毒疫苗,則更大量地應用著(zhù)組織培養。組織培養的方法有三種。
1．組織(塊)培養這就是原來(lái)意義上的所謂組織培養。將動(dòng)物組織切成小 塊在固定或懸浮狀態(tài)下培養。組織塊培養是最早的組織培養方法。
2．器官培養 取器官薄片(例如一段胎兒氣管或一小塊鼻粘膜)進(jìn)行培養,使其基本保持原來(lái)的結 構和功能,例如正常的纖毛上皮運動(dòng)。某些呼吸道病毒,就是應用器官培養才分離出來(lái)的。這 種培養還是研究器官生理機能以及某些病毒感染機理的良好工具。
3.細胞培養應用胰酶等分散劑將動(dòng)物組織消化成單個(gè)細胞懸液,適當洗滌以后,加入營(yíng)養液,通常 即可使其貼附于玻璃瓶壁上, 并生長(cháng)增殖。這樣的細胞培養物稱(chēng)作〖ZZ4〗原代細胞。將已 長(cháng)成單層的原代細胞從玻璃瓶壁上消化下來(lái)后再作培養,就是〖ZZ4〗繼代細胞。原代細胞和 繼代細胞一般地還保持原來(lái)細胞主要特性,例如繼續保持正常體細胞二倍體組型的染色體等 。經(jīng)過(guò)嚴格檢查,染色體的數目和形態(tài)正常,并且沒(méi)有污染的繼代細胞,特稱(chēng)〖ZZ6〗二倍體細 胞株。繼代細胞(包括二倍體細胞株)一般可在體外傳幾代、幾十代至一百代左右,此后不可 避免地逐漸衰老死亡。由于遺傳突變或者在理化學(xué)物質(zhì)和致瘤病毒的作用下,組織培養細 胞中有時(shí)出現惡性變細胞,也就是癌變細胞。這種癌變細胞具有很高的生長(cháng)和增殖勢能,而且 幾乎可以無(wú)限地傳代,故稱(chēng)〖ZZ5〗傳代細胞系。傳代細胞系的染色體已經(jīng)發(fā)生改變,不再保 持原來(lái)細胞的正規的二倍體組型,故又稱(chēng)為異倍體細胞。由人體和動(dòng)物體取得腫瘤組織進(jìn)行 培養,比較容易獲得傳代細胞系。為使二倍體細胞株不致因定期傳代而不斷增加代數,同時(shí) 也是為了避免發(fā)生變異,通常將其保存于-196℃的液體氮中,以甘油或二甲基亞砜作為保存劑 。這樣保存的細胞株,可以隨時(shí)取用, 甚為方便。但是必須指出,即使在已經(jīng)鑒定并已廣泛 應用的細胞系(株)中也�？赡馨l(fā)生病毒污染,例如作者等在進(jìn)口的IB〖ＤＫ〗RS〖DK〗2 系豬 腎細胞中就曾發(fā)現有一種RNA病毒的污染。
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