燈盞花組培快繁與植株再生
錄入時(shí)間:2009-6-23 17:16:24
來(lái)源：青島海博
摘要〔 目的」建立較為系統的燈盞花組培體系，培育、壯大和發(fā)展燈盞花這一獨具特色和優(yōu)勢的產(chǎn)業(yè)�！� 方法〕 以燈盞花（Erigeron bre –viscapus）的葉片為外植體，用不同濃度的激素6 一BA 、2 , 4 一D 、KT 和NAA 對其進(jìn)行愈傷組織的誘導和再生植株的研究�！� 結果〕 誘導愈傷組織最佳的培養基是MS + KT0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg/L 和MS + 2 , 4 一D0.5mg / L + 6 一BA0.5mg/L ，誘導率為100 % ；二者相比，前者長(cháng)出的愈傷組織較為緊密，而后者松散性好；MS + 6 一BA 0.5mg/L + l0 ％香蕉汁是誘導芽最佳的培養基，達87 % ；加入0.3mg/LNAA 的l /2Ms 培養基對生根最有利，生根率達83 ％�！附Y論」生長(cháng)素與細胞分裂素的合理配比有利于快速構建燈盞花培養體系。
關(guān)鍵詞：燈盞花；葉片；組織培養；植株再生
燈盞花，屬菊科（ComPositae ）飛蓬屬（Erigeron ）植物，產(chǎn)于湖南、廣西、貴州、四川、云南、西藏等省區，常見(jiàn)于海拔1200~3500m 的中山和亞高山開(kāi)闊山坡、草地、林緣，是一種民間常用藥用植物。始載于《 滇南本草》 ，臨床主要用于治療高血壓、腦栓塞、多發(fā)性神經(jīng)炎、慢性珠網(wǎng)膜炎等腦血管意外所致的癱瘓癥，總有效率為95.8 %，被列為云南重點(diǎn)培育的五大特色云藥之一。燈盞花是一種具有重要經(jīng)濟價(jià)值的藥用植物，20 多年來(lái)，野生燈盞花被大量采挖，資源不足成為制約燈盞花藥業(yè)發(fā)展的瓶頸叫。燈盞花有性繁殖效率低，其種子形成數量雖然很多，但種子瘦小、癟粒多，不能滿(mǎn)足大面積藥材栽培對種苗的需求，目前對燈盞花的研究大多數僅限于它的藥用價(jià)值及病害方面的研究川，對其組培的系統研究報道甚少。筆者以植株幼葉為外植體，對不同激素及其濃度對燈盞花愈傷組織、繼代增殖和芽的分化及生根培養等方面進(jìn)行了系統的研究，對建立較為系統的燈盞花組培體系，培育、壯大和發(fā)展燈盞花這一獨具特色和優(yōu)勢的產(chǎn)業(yè)具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際應用前景。
1 材料與方法
1.1 材料燈盞花，學(xué)名短草飛蓬。取燈盞花葉片。
1.2 培養方法① 誘導愈傷組織培養基：MS 十KT ( 0.5 、1.0 、3.0 ) + 2 , 4 一D ( 1.0 、5.0 、10.0 ) ；② MS + 2 , 4 一D ( 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 ) + 6 一BA ( 0.1 、0.2 、0.5 ) ；③ MS + 6 一BA 0.5 + NAA ( 0、0.1 、0.2 、0.5 ) ；④ 增殖培養基：MS + 2 , 4 一D 5.0 + KT 0.5 + 10 ％香蕉汁＋0.5 ％活性炭；⑤ 分化培養基：MS + 6 一BA 0.5 +IBA ( o 、0.1 、0.3 、0.5 ) + 10 ％香蕉汁；⑥ 生根培養基：l / 2MS + NAA ( 0.1 、0.2 、0.3 、0.4 、0.5 ）。上述培養基激素的濃度單位均為mg/L ，均添加2.5 ％蔗糖、0.65 ％瓊脂，pH 5.8 ，培養溫度25 ℃ ，光照度2000lx ，光照時(shí)間16 h/d 。
2 結果與分析
2.1 愈傷組織的誘導
取燈盞花幼嫩葉片，表面沖洗干凈，切成1~2cm2 耐的小塊放人70 ％的酒精中消毒30s ，用0.1 % 的HgC12 溶液浸泡3 min ，無(wú)菌水沖洗3 次，然后接種到培養基① 一③ 中暗培養，每瓶接種30 個(gè)外植體。培養8d 后，葉片呈不同程度的變厚卷曲膨大，逐漸長(cháng)出淡綠色顆粒狀的愈傷組織，14d 出現大量的愈傷組織（圖l ）。其中MS + KT 0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg / L 、MS + 2 , 4 一D0.51mg/L + 6 一BA 0.5m g/L 及MS 十6 一BA 0.5mg / L + NAA 0.lmg/L 誘導愈傷組織的出愈率均為100 % ，但是以MS 十6 一BA 0.5mg/L + NAA 0.lmg/L 生長(cháng)勢最好。
2.2 芽的分化待葉片邊緣長(cháng)出綠色的愈傷組織時(shí)，切取并轉人培養基④ 中進(jìn)行增殖培養，10d 為1 個(gè)繼代周期，繼代3 一4 次。選取生長(cháng)較好的愈傷組織接種到培養基⑤ 上分化培養，放入光照培養室培養。愈傷組織在分化培養基上培養12d ，即可觀(guān)察到愈傷組織的體積明顯增大，25d 愈傷組織表層變綠且有小芽點(diǎn)長(cháng)出，30d 有淺綠色的子葉出現，40d 后大量葉子從芽叢中生長(cháng)形成無(wú)根苗叢（圖2 ）。在誘導芽的分化過(guò)程中，以MS + 6 一BA 0.5mg/L 產(chǎn)生的芽最多。
2.3 根的形成
將不定芽轉接在生根培養基⑥ 中，進(jìn)行生根培養。6d 后有根原基生成（愈傷突起，表面附有少量白色小絨毛）。經(jīng)2 次繼代，18d 后無(wú)根苗下的愈傷片上布滿(mǎn)大量根原基并有大量的根生成。根的生長(cháng)速度為。．4mm/d 。其中生根最好的激素配比為1 / 2 MS 十NAA 0.3mg/L ，誘導生根率達83 ％以上（圖3 ）。
2.4 煉苗及移栽
當大部分苗根長(cháng)2 cm 以上時(shí)，打開(kāi)瓶蓋，煉苗3 一5d ，用鑷子將苗輕輕夾出，用清水洗去基部殘留的培養基，栽于腐殖土：珍珠巖，蛙石（2 : 1 :1 ）的基質(zhì)中，保持80 ％一85 ％濕度，成活率達95 ％以上（圖4 ）。
3 結論
以燈盞花的葉片為外植體，用不同濃度的激素6 一BA 、2 , 4 一D 、KT 和NAA 對其進(jìn)行愈傷組織的誘導和再生植株的研究。結果表明，誘導愈傷組織最佳的培養基是MS + KT 0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg/L 和MS + 2 , 4 一D 0.5mg/L + 6 一BA 0.5mg/L ，誘導率為100 % ；二者相比，前者長(cháng)出的愈傷組織較為緊密，而后者松散性好；Ms + 6 一BA 0.5mg／L 十10 ％香蕉汁是誘導芽最佳的培養基，達87 % ；加人0.3mg/L NAA 的1 / 2 MS 培養基對生根最有利，達83 ％。試驗表明，生長(cháng)素與細胞分裂素的合理配比有利于快速構建燈盞花培養體系。
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