大腸桿菌的檢測指標和方法

   
   大腸桿菌的檢測原理： 
大腸菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，該菌主要來(lái)源于人畜糞便，因此作為糞便污染指標來(lái)評價(jià)食品的衛生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。 
2.所需的儀器設備與器具： 
2.1 恒溫培養箱：36±1℃。 
2.2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。 
2.3 接種針。 
2.4 顯微鏡。 
2.5 超凈工作臺。 
2.6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。 
2.7 天平：感量0.01g。 
2.8 滅菌釜。 
2.9 培養皿（直徑為90mm）、試管，經(jīng)121℃、30分鐘滅菌。 
2.10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片 3.培養基及試劑： 
3.1 乳糖膽鹽發(fā)酵管：按照制造廠(chǎng)家使用說(shuō)明進(jìn)行配制，滅菌。 
3.2 伊紅美蘭瓊脂平板： 按照制造廠(chǎng)家使用說(shuō)明進(jìn)行配制，滅菌。 
3.3 乳糖發(fā)酵管： 按照制造廠(chǎng)家使用說(shuō)明進(jìn)行配制，滅菌。 
3.4 革蘭氏染色液。 
3.4.1 結晶紫染色液： 
結晶紫 1g 
95%乙醇 20ml 
1%草酸銨水溶液 80ml 
將結晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。 
3.4.2 革蘭氏碘液： 
碘 1g 
碘化鉀 2g 
蒸餾水 300ml 
將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300 ml。 
3.4.3 沙黃復染液： 
沙黃 0.25g 
95%乙醇 10ml 
蒸餾水 90ml 
將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。 
3.5 生理鹽水。 
4.檢驗程序： 
檢樣 
↓ 
稀釋 
↓ 
乳糖膽鹽發(fā)酵管，36±1℃，24±2hr 
↓ ↓ 
不產(chǎn)氣 產(chǎn)氣 
↓ ↓ 
大腸菌群陰性 伊紅美蘭瓊脂平板，36±1℃，24±2hr 
↓ 
報告 ↓ ↓ 
革蘭氏染色 乳糖發(fā)酵管，36±1℃，24±2hr 
↓ 
↓ ↓ ↓ ↓ 
G+ G-，無(wú)芽孢桿菌 產(chǎn)氣 不產(chǎn)氣 
↓ ↓ 
大腸菌群陰性 大腸菌群陰性 
↓ ↓ ↓ 
報告 大腸菌群陽(yáng)性 報告 
4.測定方法： 
4.1 檢樣稀釋?zhuān)?nbsp;
4.1.1 以無(wú)菌操作將檢樣25ml(或25g)放于含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌塑料燒杯中，經(jīng)充分振搖成1：10均勻稀釋液。 
4.1.2 用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的 試管中，振搖成1：100稀釋液。 
4.1.3 重復5.1.2的操作，使成1：1000稀釋液。 
4.2乳糖膽鹽發(fā)酵試驗：根據食品衛生標準要求或對檢樣污染情況的估計，選擇二個(gè)稀釋度，每一稀釋度接種3管，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管。1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。然后置于36±1 ℃培 
養箱內，培養24±2hr，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌 
群陰性；如有產(chǎn)氣者，則可按以下程序進(jìn)行。 
4.3分離培養：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養24hr后取出，觀(guān)察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色。 
4.4證實(shí)試驗：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置于36±1℃溫箱內培養24±2hr，觀(guān)察產(chǎn)氣情況。乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽(yáng)性。 
4.5報告：根據證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數，查MPN檢索表，報告每100ml(g)大腸菌群的最可能數。 

 

上一篇：出口食品中沙門(mén)氏菌（辛酯酶熒光）檢驗方法 SN 0332-94

下一篇：食品中金黃葡萄球菌的檢測方法