組培相關(guān)問(wèn)題十二

32.請問(wèn)：（１）接種前，接種工具要浸泡在酒精中，所使用的酒精濃度該是多少，是75%還是95%？（２）我用新鐵炮百合鱗片作外植體，對鱗片切割有沒(méi)講究什么方法，可以減少污染，書(shū)上講根據極性方向接種到培養基上，怎么判斷極性呢？（３）使用玻璃瓶＋不誘鋼的蓋子作為培養容器，透氣性是不是不好，會(huì )影響培養效果嗎？
答:接種工具接種灼燒前浸泡酒精的濃度，可以是75%也可以是95%的。至于極性指的就是植物材料有趨向發(fā)育的特征。比如是莖繁，靠近莖頂端發(fā)出芽子，遠離頂端會(huì )長(cháng)出根。是根繁的話(huà)，新芽發(fā)生于近心端，新根發(fā)生于遠心端。因此在接種時(shí)，盡量不要使材料倒置，盡量保持植物的極性方位，不能將莖端插入培養基內。培養容器的透氣性是決定瓶?jì)葷穸群蜌怏w狀況的主要因素，因此如果過(guò)于密封，使瓶?jì)韧獾貌坏綒怏w交換，就會(huì )不同程度的受到影響。

33.有什么方法可以是懸浮培養的植物細胞分散開(kāi),形成單細胞？
答:首先選擇一塊外觀(guān)疏松、容易碎裂、生長(cháng)快的淺色愈傷組織，用接種器具簡(jiǎn)單粉碎后，放到液體培養基中震蕩培養，經(jīng)過(guò)1－2周的培養后，懸浮液中既有游離的單細胞，又有較易破碎的細胞團，也有大的愈傷組織塊。為了提高培養物中單細胞的比例，在繼代培養時(shí)，需要用細口的移液管或注射器，只吸出游離的單細胞或小的細胞團來(lái)接種。必要時(shí)可加入少量果膠酶，培養基中和瓶壁上會(huì )有大量的單細胞和小細胞團，把他們收集后，轉移到新鮮培養基中，放到搖床上再次繼代培養。
也可將第一代細胞懸浮液停止震蕩使大的細胞塊和組織沉淀于容器底部，取上部懸浮液進(jìn)行接種，或在無(wú)菌條件下用紗布、不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾，用濾液接種。對于分散性不好的材料，經(jīng)過(guò)多次轉接后，分散程度會(huì )大大提高。