細菌的兩種鞭毛染色法

1.鍍銀法染色
（1）清洗玻片  選擇光滑無(wú)裂痕的玻片，最好選用新的。為了避免玻片相互重疊，應將玻片插在專(zhuān)用金屬架上，然后將玻片置洗衣粉過(guò)濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過(guò)濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出稍冷后用自來(lái)水沖洗、晾干，再放入濃洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自來(lái)水沖去殘酸，再用蒸餾水洗。將水瀝干后，放入95%乙醇中脫水。
（2）菌液的制備及制片：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛，所以在染色前應將待染細菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養基斜面上（培養基表面濕潤，斜面基部含有冷凝水）連續移接3-5代，以增強細菌的運動(dòng)力。最后一代菌種放恒溫箱中培養12—16h。然后，用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數環(huán)，移至盛有1—2mL無(wú)菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min（放置時(shí)間不宜太長(cháng)，否則鞭毛會(huì )脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開(kāi)。然后，吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。
    用于鞭毛染色的菌體也可用半固體培養基培養。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養基熔化后倒入無(wú)菌平皿中，待凝固后在平板中央點(diǎn)接活化了3-4代的細菌，恒溫培養12-16h后，取擴散菌落的邊緣制作涂片。
（3）染色
①滴加A液，染4—6min。
②用蒸餾水充分洗凈A液。
③用B液沖去殘水，再加B液于玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5—1min（加熱時(shí)應隨時(shí)補充蒸發(fā)掉的染料，不可使玻片出現干涸區）。
④用蒸餾水洗，自然干燥。
（4）鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。
結果：菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。
2.改良Leifson染色法
（1）清洗玻片法同1。
（2）配制染料  染料配好后要過(guò)濾15-20次后染色效果才好。
（3）菌液的制備及涂片
①菌液的制備同1。
②用記號筆在潔凈的玻片上劃分3—4個(gè)相等的區域。
③放1滴菌液于第一個(gè)小區的一端，將玻片傾斜，讓菌液流向另一端，并用濾紙吸去多余的菌液。
④干燥  在空氣中自然干燥。
（4）染色
①加染色液于第一區，使染料覆蓋涂片。隔數分鐘后再將染料加入第二區，依此類(lèi)推（相隔時(shí)間可自行決定），其目的是確定最合適的染色時(shí)間，而且節約材料。
②水洗：在沒(méi)有傾去染料的情況下，就用蒸餾水輕輕地沖去染料，否則會(huì )增加背景的沉淀。
③干燥：自然干燥。
（5）鏡檢  先低倍觀(guān)察，再高倍觀(guān)察，最后再用油鏡觀(guān)察，觀(guān)察時(shí)要多找一些視野，不要企圖在1-2個(gè)視野中就能看到細菌的鞭毛。
結果：菌體和鞭毛均染成紅色。
（五）注意事項
1.鍍銀法染色比較容易掌握，但染色液必須每次現配現用，不能存放，比較麻煩。
2.Leifson染色法受菌種、菌齡和室溫等因素的影響，且染色液須經(jīng)15-20次過(guò)濾，要掌握好染色條件必須經(jīng)過(guò)一些摸索。
3.細菌鞭毛極細，很易脫落，在整個(gè)操作過(guò)程中，必須仔細小心，以防鞭毛脫落。
4.染色用玻片干凈無(wú)油污是鞭毛染色成功的先決條件。
   

 

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