嗜酸乳桿菌酸耐受性的研究_2

2 材料和方法
2.1材料
2.1.1菌株來(lái)源
嗜酸乳桿菌 （Lactobacillus acidophilus），代號為ATCC4356；La-IM1、La-IM2 和La-IM3 分離自?xún)让晒艂鹘y發(fā)酵乳制品。
2.1.2儀器設備
紫外分光光度計、光學(xué)顯微鏡 （OLMPUS ）、梅特勒—托利多Delta320pH 計、電熱手提式壓力蒸汽滅菌器、恒溫培養箱、超凈工作臺等。
2.1.3培養基
RS培養基[9]:5g/L酵母提取物，10g/L蛋白胨，10g/L牛肉膏，20g/L葡萄糖，2g/L K HPO ，2g/L檸檬酸二銨，5g/L 乙酸鈉，0.58g/L MgSO .7H2O ，0.25g/L MnSO .4H2O, 調pH6.2～6.4，固體需加15g/L瓊脂粉，121℃滅菌15min。
2.2方法
2.2.1菌種的活化與分純
用接種環(huán)挑取少量冷凍干燥保藏的菌粉，接種于液體MRS 培養基中37℃，24h培養，連續傳代兩次進(jìn)行活化；將活化后的菌種于MRS 固體培養基上劃線(xiàn)培養，37℃，48h 培養；挑取半個(gè)單菌落染色鏡檢，如果鏡檢未發(fā)現雜菌，則用接種環(huán)挑取另外半個(gè)單菌落接種于液體MRS 培養基中培養并保存備用；如果鏡檢發(fā)現雜菌，則用接種環(huán)挑取單菌落于MRS 固體培養基上劃線(xiàn)培養，再鏡檢，直至分純。
2.2.2 4株菌酸耐受性的實(shí)驗
將4 株嗜酸乳桿菌以3% 的接種量接種于MRS 液體培養基中進(jìn)行傳代一次。用鹽酸調節M(mǎn)RS 液體培養基的pH 值為2.5，吸取4.5mL 于4 個(gè)試管中，置于高壓滅菌鍋內進(jìn)行121℃、15min滅菌。按照 10%的添加量吸取500 μL菌液分別加入到4個(gè)試管中作用3h。作用結束后，將試管在漩渦混勻器上進(jìn)行震蕩混勻，平板涂布進(jìn)行活菌計數。 
2.2.3嗜酸乳桿菌La-IM2生長(cháng)曲線(xiàn)的測定
將嗜酸乳桿菌La-IM2 按3％的接種量，接種到裝有300mL液體培養基的錐形瓶中，37℃進(jìn)行培養。每隔2h在無(wú)菌超靜工作臺中取出20mL 用于測OD600 和pH 值，直至24h，然后繪制生長(cháng)曲線(xiàn)。 
2.2.4嗜酸乳桿菌La-IM2在不同pH值條件下的酸耐受性實(shí)驗
用鹽酸調節PBS緩沖液的pH值分別為 1.5、2.5、3.5、4.5、7，然后將嗜酸乳桿菌La-IM2 按 10％的接種量接種于以上pH 值的PBS 緩沖液中，在37℃下進(jìn)行作用，作用時(shí)間分別為1.5h和3h，隨后將試管在漩渦混勻器上進(jìn)行震蕩混勻，平板涂布進(jìn)行活菌計數。 
2.2.5活菌計數方法 
每個(gè)樣品取3 個(gè)平行，用PBS 緩沖液 （pH  7）逐步稀釋5個(gè)梯度。以MRS 固體培養基為計數培養基，于37℃培養48～72h后平板計數[10]，選擇平板上菌落數在30～300個(gè)菌落的平板，統計菌落數，最后求取平均值。    
   

 

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