食品衛生微生物學(xué)檢驗蠟樣芽胞桿菌檢驗2——GB

6、操作步驟
6.1菌數測定以無(wú)菌操作將檢樣25g（mL)，用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液做成10（-1）——10（-5）的稀釋液按GB/T4789.2測定。取各稀釋液0.1mL，接種在兩個(gè)選擇性培養基一甘露醉卵黃多粘菌素（MYP）瓊脂培養基上，用L形棒涂布于整個(gè)表面，置36℃士1℃培養12h——20h，選取適當菌落數的平板進(jìn)行計數，蠟樣芽胞桿菌在此培養基上的菌落為粉紅色（表示不發(fā)酵甘露醇）周?chē)�有粉紅色的暈（表示產(chǎn)生卵磷脂酶）。計數后，從中挑取五個(gè)此種菌落做證實(shí)試驗，根據證實(shí)的蠟樣芽胞桿菌的菌落數計算出該平板上的菌落數，然后乘其稀釋倍數，即得每克（毫升）樣品中所含蠟樣芽胞桿菌數。例如：將0.1ml 10（-4）樣品稀釋液涂布于MYP平板上，其可疑菌落為25個(gè)，取五個(gè)鑒定，證實(shí)四個(gè)菌落為蠟樣芽胞桿菌，則1g(mL）檢樣中所含蠟樣芽胞桿菌數為：25*（4/5）*100000=20000006.2分離培養取檢樣或稀釋液劃線(xiàn)分離于選擇性培養基（MYP）上，置37℃培養12h～20h，挑取可疑的蠟樣芽胞桿菌菌落（見(jiàn)6.1）接種于肉湯和營(yíng)養瓊脂做成純培養，然后做證實(shí)試驗
6.3證實(shí)試驗
6.3.1形態(tài)觀(guān)察本菌為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，寬度在1um或1um以上，芽胞壘卵圓形，不突出菌體，多位于菌體中央或稍偏子一端．6.3.2培養特性本菌在肉湯中生長(cháng)混濁，常微有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化；在普通瓊脂平板上其菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣不整齊。
6.3.3生化性狀及生化分型
6.3.3.1生化性狀本菌有動(dòng)力；能產(chǎn)生卵磷脂酶和酩蛋白酶；過(guò)氧氫酶試驗陽(yáng)性；溶血；不發(fā)酵甘露醇和木糖；常能液化明膠和使硝酸鹽還原。在厭氧條件下能發(fā)酵葡萄糖。
6.3.3.2生化分型根據蠟樣芽胞桿菌對檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、淀粉水解、V-P反應、明膠液化性狀的試驗，分成不同型別。
6.3.4與類(lèi)似菌鑒別
本菌在生化性狀上與蘇云菌芽胞桿菌極為相似．但后者可籍細胞內產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素結晶加以鑒別。其檢查方法如下：取營(yíng)養瓊脂上純培養物少許，加少量蒸餾水涂于玻片上，待自然千燥后用弱火焰固定，加甲醉于玻片上，半分鐘后傾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加0.5％堿性復紅液，并用酒精燈加熱至微見(jiàn)蒸氣維持1.5min，移去酒精燈，將玻片放置半分鐘，傾去染液，置潔凈自來(lái)水充分漂洗、晾干、鏡檢。在油浸鏡下檢查有無(wú)游離芽胞和深染的似菱形的紅色結晶小體（如未形成游離穿胞，培養物應放室溫再保存ld—2d后檢查），如有即為蘇云金芽胞桿菌，蠟樣芽胞桿菌檢查為陰性。   
   

 

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