實(shí)驗三十三 化學(xué)因素對微生物的影響

一、基本原理
　　常用的化學(xué)消毒劑主要有重金屬及其鹽類(lèi)，酚、醇、醛等有機化合物以及碘、表面活性劑等。它們的殺菌或抑菌作用主要是使菌體蛋白質(zhì)變性，或者與酶的—SH基結合而使酶失去活性所致。
　　本實(shí)驗是觀(guān)察某些常用的化學(xué)藥品在一定濃度下對微生物的致死或抑菌作用，從而了解它們的殺菌或抑菌性能。
　　為了比較各種化學(xué)消毒劑的殺菌能力，常以石炭酸為標準，即將某一消毒劑作不同稀釋后，在一定條件下，一定時(shí)間內致死全部供試微生物的最高稀釋濃度，與達到同樣效果的石炭酸的最高稀釋度的比值，稱(chēng)為這種消毒劑對該種微生物的石炭酸系數（酚系數）。石炭酸系數越大，說(shuō)明該消毒劑殺菌能力越強。
二、器材
　　大腸桿菌，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；
　　牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，2．5％碘酒，0．1％升汞（HgCl2），5％石炭酸，75％酒精，1％來(lái)蘇爾，0．25％新潔爾滅， 0．005％龍膽紫，0．05％龍膽紫；
　　培養皿，濾紙片，試管，吸管等。
三、操作步驟
　　1．各種化學(xué)藥品的殺菌作用
　　(1)用無(wú)菌吸管吸取培養18小時(shí)的白色葡萄球菌菌液0．2ml于無(wú)菌平皿內。
　　(2)倒入已溶化并冷至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基于上述平皿內，充分搖勻，水平放置，待凝。
　　(3)將上述已凝固的平皿用記號筆在平皿底劃成八等份，每一等份內標明一種藥物的名稱(chēng)。
　　(4)用無(wú)菌鑷子將小圓形濾紙片分別浸入各種藥品中，取出，并在試管內壁上除去多余藥液后，以無(wú)菌操作將紙片對號放入培養皿的小區內，如圖Ⅸ-1。
　　(5)將上述放好濾紙片的含菌平皿，倒置于37℃溫室中培養24小時(shí)后，取出測定抑菌圈大小，并說(shuō)明其殺菌強弱。
　　2．石炭酸系數的測定
　�。�1）將5％（1：20）的石炭酸液按表Ⅸ-1配成不同濃度，每管5ml。
　�。�2）將待測藥物（來(lái)蘇爾）先配成1：20的原液，再按表Ⅸ-2配成不同濃度，每管 5ml。
　　 （3）取肉膏蛋白胨液體培養基30管，1—15管標明石炭酸的5種濃度，每種濃度3管，每3管分5、10、15分鐘處理，16—30管標明來(lái)蘇爾的5種濃度，同樣每種濃度3管，每3管分5、10、15分鐘處理。
　　 （4）在上述不同濃度的石炭酸和來(lái)蘇爾溶液中，各接入0．5ml大腸桿菌液，搖勻。注意每管自接種時(shí)起在5、10、15分鐘，用同一接種環(huán)從各管內取一環(huán)接入上述已標記的液體培養基試管中。
　�。�5）置37℃溫室中培養 48小時(shí)，觀(guān)察并記錄生長(cháng)情況。生長(cháng)者溶液混濁，以“+”表示；不生長(cháng)者溶液澄清，以“-”表示。
　�。�6）計算系數值 找出在5分鐘生長(cháng)，而在10分鐘和15分鐘均不生長(cháng)的石炭酸及來(lái)蘇爾的最大稀釋度，計算二者的比值。例如石炭酸在10分鐘內殺死大腸桿菌的最大稀釋度是1：70，來(lái)蘇爾是1：250，則來(lái)蘇爾的石炭酸系數為250/70=3．6。
四、實(shí)驗報告   
   

 

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