實(shí)驗二十三 高壓蒸汽滅菌

一、基本原理
　　高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。
　　在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低（表Ⅵ-2），二是濕熱的穿透力比干熱大（表Ⅵ-3）；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100℃時(shí)，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時(shí)可放出2．26kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。
　　在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸汽中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。
　　一般培養基用1．05kg /cm2，121．3℃15—30分鐘可達到徹底滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。例如含糖培養基用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃滅菌15分鐘，但為了保證效果，可將其他成分先行121．3℃，20分鐘滅菌，然后以無(wú)菌操作手續加入滅菌的糖溶液。又如盛于試管內的培養基以1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘即可，而盛于大瓶?jì)鹊呐囵B基最好以1．05kg/cm2滅菌30分鐘。
　　實(shí)驗室中常用的高壓蒸汽滅菌鍋有立式、臥式和手提式等幾種，其構造如圖Ⅵ-4。本實(shí)驗介紹手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法。
二、器材
　　牛肉膏蛋白胨培養基，培養皿（6套一包），手提式高壓蒸汽菌鍋等。
三、操作步驟
　　1．首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。
　　2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
　　3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以?xún)蓛蓪ΨQ(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。
　　4．用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。
　　5．滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，就會(huì )因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發(fā)生污染。
　　6．將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時(shí)，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(cháng)，即可待用。
四、實(shí)驗報告   
   

 

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