實(shí)驗十八 微生物大小的測定

一、基本原理
　　微生物細胞大小，是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類(lèi)鑒定的依據之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下測量。用來(lái)測量微生物細胞大小的工具有目鏡測微尺（圖Ⅳ-4）和鏡臺測微尺（圖Ⅳ-5）。
　　鏡臺測微尺（圖Ⅳ-5）是中央部分刻有精確等分線(xiàn)的載玻片。一般將1mm等分為100格（或2mm等分為200格），每格長(cháng)度等于0．01mm（即106μm）。是專(zhuān)用于校正目鏡測微尺每格長(cháng)度的。
　　目鏡測微尺（圖Ⅳ-4，A）是一塊可放在接目鏡內的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長(cháng)線(xiàn)相隔。由于所用接目鏡放大倍數和接物鏡放大倍數的不同，目鏡測微尺每小格所代表的實(shí)際長(cháng)度也就不同，因此，目鏡測微尺不能直接用來(lái)測量微生物的大小，在使用前必須用鏡臺測微尺進(jìn)行校正，以求得在一定放大倍數的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值，然后才可用來(lái)測量微生物的大小。
二、器材
　　枯草芽孢桿菌染色玻片標本，目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微鏡，擦鏡紙，香柏油等。
三、操作步驟
　　1．目鏡測微尺的標定
　　(1)放置目鏡測微尺取出接目鏡，旋開(kāi)接目鏡透鏡，將目鏡測微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內的隔板上（圖Ⅳ-4，B），然后旋上接目透鏡，最后將此接目鏡插入鏡筒內（圖Ⅳ-4，C）。
　　(2)放置鏡臺測微尺將鏡臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上，使刻度面朝上。
　　(3)校正目鏡測微尺先用低倍鏡觀(guān)察，對準焦距，當看清鏡臺測微尺后，轉動(dòng)接目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)器，使目鏡測微尺和鏡臺測微尺的某一區間的兩對刻度線(xiàn)完全重合，然后計數出兩對重合線(xiàn)之間各自所占的格數（圖Ⅳ-6）。
　　根據計數得到的目鏡測微尺和鏡臺測微尺重合線(xiàn)之間各自所占的格數，通過(guò)如下公式換算出目鏡測微尺每小格所代表的實(shí)際長(cháng)度。
　　目鏡測微尺每小格長(cháng)度（μm）=
　　同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長(cháng)度。
　　2．菌體大小的測定
　　目鏡測微尺校正后，移去鏡臺測微尺，換上枯草芽孢桿菌染色玻片標本，校正焦距使菌體清晰，轉動(dòng)目鏡測微尺（或轉動(dòng)染色標本），測出枯草芽孢桿菌的長(cháng)和寬各占幾小格，將測得的格數乘以目鏡測微尺每小格所代表的長(cháng)度，即可換算出此單個(gè)菌體的大小值，在同一涂片上需測定10至20個(gè)菌體，求出其平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數生長(cháng)期的菌體來(lái)進(jìn)行測定。
　　3．取出目鏡測微尺，將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦拭后，放回盒內保存。
四、實(shí)驗報告
(1)將目鏡測微尺校正結果填入下表。
(2)在高倍鏡下測量枯草芽孢桿菌大小結果填入下表。
　　   
   

 

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