實(shí)驗十七 細菌、放線(xiàn)菌、酵母菌、霉菌的菌落觀(guān)察和細菌菌落制片

一、墓本原理
　　菌落形態(tài)是指某種微生物在一定的培養基上由單個(gè)菌體形成的群體形態(tài)。細菌、放線(xiàn)菌、酵母菌和霉菌，每一類(lèi)微生物在一定培養條件下形成的菌落各具有某些相對的特征，利用觀(guān)察這些特征，來(lái)區分各大類(lèi)微生物及初步識別、鑒定微生物，方法簡(jiǎn)便快速，在科研和生產(chǎn)實(shí)踐中常被采用。
　　利用血液培養基富有營(yíng)養及粘性等特性來(lái)培養細菌，在此培養基上生長(cháng)的菌落在固定時(shí)粘性很大，能夠牢固地附著(zhù)在載玻片或蓋玻片上，便于制片和觀(guān)察。另外，血液培養基又是較好的保存菌種用培養基，故由此培養基所制的菌落制片能保存較長(cháng)時(shí)間。
二、器材
　　圓褐固氮菌，枯草芽孢桿菌，灰色鏈霉菌，釀酒酵母，青霉的單個(gè)菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；
　　Bouin氏固定液，0．01％結晶紫溶液，羊血或兔血，肉膏蛋白胨瓊脂培養基，酒精等。
三、操作步驟
　　1．觀(guān)察圓褐固氮菌、枯草芽孢桿菌、灰色鏈霉菌、釀酒酵母、青霉的單個(gè)菌落特征，并按實(shí)驗一菌落特征描述的方法記錄結果。
　　2．血液瓊脂培養基的制備：
　　(1)成分pH7．6肉膏蛋白胨瓊脂培養基10ml，無(wú)菌脫纖維羊血（或兔血）1ml。
　　(2)將肉膏蛋白胨瓊脂培養基加熱溶化。
　　(3)待冷至45℃時(shí)，以無(wú)菌操作加1ml無(wú)菌脫纖維羊血于培養基內，立即搖蕩使血液和瓊脂培養基充分混勻。
　　(4)迅速以無(wú)菌操作倒入平板，使成血液瓊脂平板，注意不要產(chǎn)生氣泡。
　　(5)置37℃過(guò)夜，如無(wú)菌生長(cháng)即可使用。
　　(6)將無(wú)菌的平板取出進(jìn)行劃線(xiàn)接種分離單個(gè)菌落，因要保持瓊脂表面完整，接種改用圓頭光滑玻棒，注意不要把瓊脂劃破。接種后，倒置于37℃溫室中培養，次日觀(guān)察結果。如有單獨菌落出現，即可進(jìn)行下項實(shí)驗。
　　3．細菌菌落制片
　　(1)細菌菌落印取選擇一個(gè)較小的單獨菌落，用小刀將菌落周?chē)�約10—15mm的正方瓊脂切下，將此瓊脂塊上長(cháng)有菌落的一面朝下，輕放在蓋玻片上，然后連同瓊脂塊將蓋玻片小心放于Bouin氏固定液中約1小時(shí)，直至瓊脂完全變?yōu)榘咨�后取出，將瓊脂小心剝去，剝時(shí)注意勿損傷菌落，僅使菌落留下，附著(zhù)在蓋玻片上。
　　(2)用細水流輕輕沖洗附有菌落的蓋玻片。
　　(3)用0．01％結晶紫染液染色3分鐘后水洗，吸干。
　　(4)脫水將蓋玻片置于由低濃度到高濃度的酒精中（35％、50％、60％、70％、80％、95％、100％）各5分鐘，但在100％酒精中浸15分鐘。
　　(5)透明取出經(jīng)過(guò)脫水的蓋玻片，再放入二甲苯中2分鐘。
　　(6)封固從二甲苯中取出蓋玻片，用軟紙拭去菌落周?chē)�的二甲苯。隨即加一小滴加拿大乳膠于一潔凈載玻片的中央，迅速反轉蓋玻片，輕輕地放在載玻片上，使加拿大乳膠鋪滿(mǎn)蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡，如果有氣泡即輕輕壓出。用低倍顯微鏡觀(guān)察其菌落特征。待乳膠完全干燥，一二天后裝木匣內保存。
四、實(shí)驗報告   
   

 

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