實(shí)驗十六 霉菌的形態(tài)觀(guān)察

一、基本原理
　　霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片其特點(diǎn)是：(a)細胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長(cháng)時(shí)間；(c)溶液本身呈藍色，有一定染色效果。
　　霉菌自然生長(cháng)狀態(tài)下的形態(tài)，常用載玻片觀(guān)察，此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養基上，培養后用顯微鏡觀(guān)察。此外，為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養法進(jìn)行觀(guān)察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長(cháng)在覆蓋于瓊脂培養基表面的玻璃紙上，然后將長(cháng)菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上用顯微鏡觀(guān)察。
二、器材
　　曲霉（Aspergillussp．），青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．），毛霉（Mucor sp．）；
　　乳酸石炭酸棉藍染色液，20％甘油，查氏培養基平板，馬鈴薯培養基；無(wú)菌吸管，載玻片，蓋玻片，U形棒，解剖刀，玻璃紙，濾紙等。
三、操作步驟
　　1．一般觀(guān)察法
　　于潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細心地將菌絲挑散開(kāi)，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀(guān)察，必要時(shí)再換高倍鏡。
　　2．載玻片觀(guān)察法
　　(1)將略小于培養皿底內徑的濾紙放入皿內，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數套（根據需要而定）如此裝置的培養皿疊起，包扎好，用1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌，備用。
　　(2)將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后，用無(wú)菌解剖刀切成0．5—1cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養皿內的載玻片上，每片上放置2塊。
　　(3)用滅菌的尖細接種針或裝有柄的縫衣針，�。ㄈ庋鄯侥芸匆�(jiàn)的）一點(diǎn)霉菌孢子，輕輕點(diǎn)在瓊脂塊的邊緣上，用無(wú)菌鑷子夾著(zhù)立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上，再蓋上皿蓋。
　　(4)在培養皿的濾紙上，加無(wú)菌的20％甘油數毫升，至濾紙濕潤即可停加。將培養皿置28℃培養一定時(shí)間后，取出載玻片置顯微鏡下觀(guān)察。
　　3．玻璃紙透析培養觀(guān)察法
　　(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無(wú)菌水，洗下孢子，制成孢子懸液。
　　(2)用無(wú)菌鑷子將已滅菌的、直徑與培養皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養基平板上。
　　(3)用1ml無(wú)菌吸管吸取0．2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無(wú)菌玻璃刮棒涂抹均勻。
　　(4)置28℃溫室培養48小時(shí)后，取出培養皿，打開(kāi)皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養基分開(kāi)，再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上，用顯微鏡觀(guān)察。
四、實(shí)驗報告   
   

 

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