實(shí)驗十三 放線(xiàn)菌形態(tài)的觀(guān)察

一、基本原理
　　和細菌的單染色一樣，放線(xiàn)菌也可用石炭酸復紅或呂氏堿性美藍等染料著(zhù)色后，在顯微鏡下觀(guān)察其形態(tài)。玻璃紙具有半透膜特性，其透光性與載玻片基本相同，使放線(xiàn)菌生長(cháng)在玻璃紙瓊脂平皿上，然后將長(cháng)菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上，用顯微鏡即可觀(guān)察到放線(xiàn)菌自然生長(cháng)的個(gè)體形態(tài)。
　　放線(xiàn)菌是由不同長(cháng)短的纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養基中的營(yíng)養菌絲（或稱(chēng)基內菌絲）和生長(cháng)在培養基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類(lèi)的重要依據。
二、器材
　　細黃鏈霉菌（5406放線(xiàn)菌，Streptomyces microflavus）或灰色鏈霉菌（S．griseus）；弗氏鏈霉菌（S．fradiae）；
　　石炭酸復紅染液，呂氏堿性美藍染液，加拿大樹(shù)膠，玻璃紙，高氏1號培養基；
　　顯微鏡，載玻片，蓋玻片，玻璃棒，接種鏟，小刀，鑷子等。
三、操作步驟
1．放線(xiàn)菌自然生長(cháng)狀態(tài)的觀(guān)察
(1)將滅菌后的高氏1號培養基倒入培養皿，每皿倒15ml左右，凝固后備用。
(2)用經(jīng)火焰滅過(guò)菌的小鑷子將滅菌優(yōu)質(zhì)玻璃紙平鋪在平皿培養基上，如果瓊脂培養基和玻璃紙之間有氣泡，可以用滅過(guò)菌的玻璃棒將氣泡除去。
(3)將3—5ml無(wú)菌水倒入弗氏鏈霉菌的斜面培養物里，制成菌懸液，再適當稀釋。
(4)用無(wú)菌吸管取0．1ml的孢子懸液稀釋液，接種在玻璃紙上，并用無(wú)菌玻璃棒涂勻后，置28℃培養，直至菌長(cháng)好，備用。
(5)在潔凈的載玻片上滴一小滴水，稍涂布。取出培養皿，打開(kāi)皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養基分開(kāi)，再用剪刀剪取小片長(cháng)有菌的玻璃紙，菌面朝上放在載玻片的水面上，使紙平貼載玻片。
(6)將載玻片置顯微鏡下觀(guān)察。
　　附：玻璃紙滅菌方法在玻璃紙滅菌時(shí)，若直接將干燥的玻璃紙滅菌，它就會(huì )縮小，不便使用。故需作如下處理：將玻璃紙和濾紙剪成培養皿大小的圓形紙片，用水浸泡后把濕濾紙和玻璃紙交互重疊地放在培養皿中，借濾紙將玻璃紙隔開(kāi)。然后進(jìn)行濕熱滅菌，備用。
2．營(yíng)養菌絲的觀(guān)察
(1)用接種鏟連同培養基挑取細黃鏈霉菌菌苔置載玻片中央。
(2)用另一載玻片將其壓碎，棄去培養基，制成涂片，干燥、固定。
(3)用呂氏堿性美藍染液或石炭酸復紅染液染0．5—1分鐘，水洗。
(4)干燥后，用油鏡觀(guān)察營(yíng)養菌絲的形態(tài)。
3．氣生菌絲與營(yíng)養菌絲的比較觀(guān)察
(1)將高氏1號培養基倒入無(wú)菌培養皿，制成4mm左右的培養基平板，經(jīng)培養檢驗后無(wú)菌，備用。
(2)用火焰滅菌的鑷子將無(wú)菌蓋玻片以45度傾斜角插入平皿培養基瓊脂內，然后將細黃鏈霉菌的孢子懸液（濃度以稀釋10-2—10-3為好），接種在蓋玻片與平皿培養基的界面上。
(3)倒置于28℃培養4—5天后，小心地將蓋玻片取出，把有菌的一面朝上，放在載玻片上，置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察。一般情況是氣生菌絲顏色較深，并比營(yíng)養菌絲粗二倍左右。
4．孢子絲及孢子的觀(guān)察
(1)將培養3—4天的細黃鏈霉菌的培養皿打開(kāi)，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀(guān)察氣生菌絲和孢子絲的形態(tài)，注意其分枝情況、卷曲情況等。
(2)取清潔的蓋玻片一塊，在菌落上面輕輕按壓一下，然后將印有痕跡的一面朝下放在有一滴呂氏堿性美藍染液的載玻片上，將孢子等印浸在染液中，制成印片。用油鏡觀(guān)察孢子的形狀、孢子絲等。
(3)取干凈載玻片一塊，在玻片中央加一小滴加拿大樹(shù)膠，使樹(shù)膠攤成一薄層，放置數分鐘，使略微晾干（但不要過(guò)分干燥）。然后用小刀切取細黃鏈霉菌培養體一塊（帶培養基切下）。將培養體表面貼在涂有樹(shù)膠的玻片上，用另一玻片輕輕按壓（不要壓碎），然后將放線(xiàn)菌培養體小心棄去，注意不要使培養體在玻片上滑動(dòng)，否則印痕模糊不清。將制好的印片通過(guò)火焰固定，用石炭酸復紅染色1分鐘，水洗，晾干（不能用吸水紙吸干）。用油鏡觀(guān)察孢子絲的形態(tài)及孢子排列情況。
四、實(shí)驗報告   
   

 

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