實(shí)驗十二 細菌細胞壁的染色法和細胞質(zhì)膜的觀(guān)察

一、基本原理
　　細菌細胞壁很薄，革蘭氏陽(yáng)性菌的細胞壁為20—30nm，革蘭氏陰性菌的細胞壁為10—13nm。組成細菌細胞壁的主要化學(xué)成分是肽聚糖，它與染料結合的能力差，不易著(zhù)色，在細菌的染色過(guò)程中，一般情況染料都是通過(guò)細胞壁的滲透、擴散等作用而進(jìn)入細胞，細胞壁本身并未染色，因此，欲通過(guò)染色來(lái)觀(guān)察細胞壁，必須設法使細胞壁能著(zhù)色，而細胞質(zhì)則不易著(zhù)色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著(zhù)色的復合物，而使細胞質(zhì)不易被著(zhù)色，經(jīng)結晶紫或甲基綠染色后，便可在普通光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察到細胞壁。
　　根據細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理后，會(huì )產(chǎn)生質(zhì)壁分離這一現象，經(jīng)染色后也可在普通光學(xué)顯微鏡下區分細胞壁和細胞質(zhì)膜。
二、器材
　　巨大芽孢桿菌（Bacillus megatherium），枯草芽孢桿菌；
　　0．2％結晶紫水溶液，5％單寧酸（鞣酸）水溶液，1％磷鉬酸水溶液，1％甲基綠水溶液，25％NaCl水溶液，0．01％結晶紫水溶液，Bouin氏固定液，0．1％硫堇（thionine）水溶液，乙醚，乙醚蒸氣瓶等。
三、操作步驟
1．單寧酸法
(1)將培養16—18小時(shí)的巨大芽孢桿菌按常法制成涂片。
(2)用5％單寧酸染5分鐘后，水洗。
(3)用0．2％結晶紫染3—5分鐘，水洗，吹干。用油鏡觀(guān)察，細胞壁呈紫色，細胞質(zhì)呈淡紫色。
2．磷鉬酸法
(1)制備濃厚的涂片，在未干時(shí)浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鐘。
(2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鐘。
(3)水洗后，吹干，用油鏡觀(guān)察。細胞壁為綠色，細胞質(zhì)無(wú)色。
3．區分細胞壁與細胞質(zhì)膜
(1)乙醚蒸氣法
(a)將巨大芽孢桿菌涂布于蓋玻片上，翻轉蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鐘。
(b)取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鐘后取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒鐘。
(d)水洗，水封，置油鏡下觀(guān)察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液于潔凈的載玻片上。
(b)挑一小環(huán)培養6小時(shí)的枯草芽孢桿菌，在25％NaCl水滴中涂布均勻，待自然干燥。
(c)滴加0．01％結晶紫于其上，使蓋滿(mǎn)有菌部分，30秒鐘后水洗，干燥，用油鏡觀(guān)察結果。
四、實(shí)驗報告   
   

 

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