致病性嗜水氣單胞菌檢驗方法——GB 2

2.2.4 吲哚試驗 
2.2.4.1在長(cháng)有細菌的AHM鑒別培養基頂部，滴加3-4滴Kovacs試劑(見(jiàn)附錄B中B1), 
2.2-4.2若沿試管內壁出現紅色環(huán)者，表明產(chǎn)生叫噪，判為陽(yáng)性。 
2.2.4.3嗜水氣單胞菌應為陽(yáng)性。 
2.2.5 革蘭氏染色 
2.2.5.1在一干凈載玻片上滴加一滴蒸餾水。 
2.2.5.2用鉑金耳取AHM鑒別培養基表面菌落少許。 
2.2-5,3在載玻片上與蒸餾水混合并均勻涂布。 
2.2-5.4 自然干燥，火焰固定。 
2.2.5.5加草酸錢(qián)結晶紫染液(見(jiàn)附錄B中B2)染1min-2min, 
2.2-5.6 流水沖洗。 
2.2.5.7加革蘭氏碘液(見(jiàn)附錄B中B3)作用1min-2min, 
2.2-5.8流水沖洗。 
2.2.5.9加復紅酒精染液(見(jiàn)附錄B中B4)染50s-60s, 
2.2.5.10流水沖洗。 
2.2.5.11干燥，鏡檢。 
2.2.5.12 嗜水氣單胞菌應為革蘭氏陰性短桿菌。 
2.2.6 糖發(fā)酵試驗 
2.2.6.1用鉑金耳取AHM鑒別培養基表面菌落少許。 
2.2-6.2分別接種葡萄糖、蔗糖、阿拉伯搪、七葉昔及水楊昔等5種糖發(fā)醉試驗管(見(jiàn)附錄B中B5)。 
2.2.6.3 28℃培養24h, 
2.2-6.4 凡試驗管顏色從紫色變?yōu)辄S色，表明細菌可發(fā)酵該種糖類(lèi)，判為陽(yáng)性。 
2.2.6.5嗜水氣單胞菌可發(fā)酵以上5種糖類(lèi)。 
2.3嗜水氣單胞菌致病性鑒定 
2.11脫脂奶平板試驗 
2.3.1.1用鉑金耳取AHM鑒別培養基表面菌落少許 
2.3.1.2 接種劃線(xiàn)于1%脫脂奶蔗糖胰蛋白脈平板(見(jiàn)附錄A中A6)。
2.3.1.3 28℃培養24h, 
2.3.1.4 若菌落周?chē)�出現清晰、透明的溶蛋白圈，判為陽(yáng)性 
2.3.2 斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫試驗 
2-3-2.1用鉑金耳取AHM鑒別培養基表面菌落少許。 
2.3-2-2接種蔗糖胰蛋白陳肉湯(見(jiàn)附錄A中A7), 
2.3-2.328℃搖床(30r/min)培養48h。 
2.12.4 10000r/min離心10min，取上清。 
2.3.2.5用微量加樣器取5uL點(diǎn)樣于硝酸纖微素膜光面。 
2.3.2.6 37℃烘干。 
2.3.2.7 N20%脫脂奶中，37℃封閉1h, 
2.3.2.8用含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液(見(jiàn)附錄B中B6)洗5次，每次2min 
2.3.2.9置1：50兔抗嗜水氣單胞菌蛋白酶抗血清中，37℃作用1h。 
2.3.2.10用含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液洗5次，每次2min。
2.3.2.11置1：10酶標羊抗兔抗血清中，37℃作用1h。
2.3.2.12 用含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液洗5次，每次2min。 
2.3.2.13加3,3一二氨基聯(lián)苯胺一過(guò)氧化氫(見(jiàn)附錄B中B7)中顯色。 
2.3-2-14 待斑點(diǎn)明顯后，用去離子水終止顯色。 
2.3-2-15 設無(wú)菌肉湯作陰性對照。 
2.3.2.16 以出現明顯棕色斑點(diǎn)者判為陽(yáng)性。    
   

 

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