致病性嗜水氣單胞菌檢驗方法——GB 1

1范圍 
  本標準規定了致病性嗜水氣單胞菌的檢驗方法。 
  本標準適用于患病魚(yú)類(lèi)等易感動(dòng)物及水樣中致病性嗜水氣單胞菌的分離、鑒定，也可用于送檢菌株的鑒定。 
2 致病性嗜水氣單胞菌檢驗程序 
  檢驗程序的流程示意圖見(jiàn)附錄C(提示的附錄)。 
2.1 嗜水氣單胞菌的分離 
2.1.1準備 
2.1門(mén).1各種培養的制備方法見(jiàn)附錄A(標準的附錄)。 
2.1.1.2各種試劑的制備方法見(jiàn)附錄B(標準的附錄) 
2.1.2 待檢樣本 
    待檢樣本可包括病料、水樣及送檢菌株，病料既可是無(wú)菌采取的易感動(dòng)物的腎、肝、脾等未污染病料，也可是糞便或病變皮膚等污染病料，如樣本為菌株，應先接種于普通肉湯(見(jiàn)附錄A中A1),28℃培養24h，再劃線(xiàn)接種于普通瓊脂平板(見(jiàn)附錄A中A2)，使之形成單個(gè)菌落，以供鑒定用。 
2.3 分離 
2.1.3.1未污染病料的分離 
2.1.3.1.1接種環(huán)(鉑金耳)火焰滅菌，冷卻。 
2.13.1.2 用接種環(huán)蘸取病料 
2.1.31.3劃線(xiàn)接種于普通瓊脂平板。 
2.1.3.1.4 28℃培養24h。 
2.13.2 污染病料的分離 
2.1.3.2.1接種環(huán)(鉑金耳)火焰滅菌，冷卻。 
2.1.3.2.2用接種環(huán)蘸取病料。 
2.1.3.2.3接種于RS瓊脂平板(見(jiàn)附錄A中A3), 
2.1.3.2.4 28℃培養24h。
2.1.3.3 水樣的分離：
2.1.3.3.1用孔徑為0.2pm的硝酸纖維素微孔濾膜過(guò)濾水樣。 
2.1.3.3.2取出濾膜，置含有滅菌堿性蛋白陳水(見(jiàn)附錄A中A4)的試管中。 
2.1.3.3.3 28℃培養24h。 
2.1.3.3.4劃線(xiàn)接種于普通瓊脂平板。 
2.1.3.3.5 28℃培養24h。
2.2嗜水氣單胞菌的鑒定 
2.2.1菌落形態(tài) 
    嗜水氣單胞菌在普通瓊脂平板上。28-C培養24h后的菌落為光滑、微凸、圓整、無(wú)色或淡黃色，有特殊芳香氣味 
2.2.2 氧化酶試驗 
2.2.2.1用鉑金耳挑取普通瓊脂平板上單個(gè)菌落少許。 
2.2.2.2涂布于浸有1%鹽酸四甲基對苯胺(見(jiàn)附錄B中BI)的濾紙片上。 
2.2.2.3 10s內觀(guān)察細菌涂布處的顏色。 
2.2.2.4 若細菌涂布處出現紅色，判為陽(yáng)性。 
2.2.2.5嗜水氣單胞菌應為陽(yáng)性。 
2.2.3AHM鑒別培養 
2.2.3.1用鉑金耳挑取普通瓊脂平板上氧化酶試驗陽(yáng)性的單個(gè)菌落少許。 
2.2-3.2 穿刺接種AHM鑒別培養基(見(jiàn)附錄A中A5) 
2.2.3.3 37C培養24h。 
2-2-3.4 嗜水氣單胞菌的表現為:頂部仍為紫色，底部為淡黃色;細菌沿穿刺線(xiàn)呈刷狀生長(cháng)，即運動(dòng)力陽(yáng)性;部分菌株頂部呈黑色。    
   

 

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