進(jìn)出口食品中單核細胞增生李斯特氏菌檢測方法——3

6.5.10  糖發(fā)酵試驗
將TSB-YE肉湯培養物分別接種于0.5%葡萄糖、麥芽糖、七葉苷、甘露醇、鼠李糖、木糖發(fā)酵管內，于35℃培養21h～48h,陽(yáng)性繼續培養到第5天，李斯特氏菌不產(chǎn)氣。
6.5.11  尿素酶試驗    
用TSB-YE肉湯培養物穿刺接種于尿素酶瓊脂斜面上，于35℃培養5d，逐日觀(guān)察李斯特氏菌成尿素酶試驗陰性反應，斜面無(wú)顏色變化
6.5.12  協(xié)同溶血試驗（caMP）
在羊血瓊脂平板上各劃一直線(xiàn)，使兩線(xiàn)平行，在兩平行線(xiàn)上分別接種β型溶血金黃色葡萄球菌（S.aureus）ATCC4944和馬紅球菌（R.equi）, ATCC6939培養基，在該兩線(xiàn)之間垂直劃線(xiàn)接種待測菌培養基，與兩線(xiàn)相近但不相交，于35℃培養24h~48h后，觀(guān)察相交處溶血情況，單核細胞增生李斯特氏菌和西爾李斯特氏菌（L.seeligeri）在靠近金黃色葡萄球菌接種點(diǎn)附近的的容血增強，可見(jiàn)有明顯的箭頭狀溶血現象，其他李斯特氏菌不產(chǎn)生溶血。
6.5.13 API鑒定試驗
API鑒定實(shí)驗可代替6.5.7~6.5.12試驗，具體方法；檢查6.5.1~6.5.4中符合李斯特氏菌特征的菌株，傳代分離于7%羊血瓊脂平板，按API Listerin鑒定系統說(shuō)明書(shū)所述方法進(jìn)行鑒定，應用說(shuō)明書(shū)提供的數值編碼表得到鑒定結果。
6.5.4血清學(xué)檢驗
將TSB-YE肉湯培養基接種到3mlTSB-YE肉湯中，于35℃培養24h接種2支TSA-Y瓊脂斜面，于35℃培養24h，用3ml. 0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液將斜面菌苔洗下，菌懸液于80℃水溶中加熱1h，以2500r/min離心30min，棄去2ml上清液，將剩余液與沉淀混勻制成菌懸液血清學(xué)玻片凝集實(shí)驗，
李斯特氏菌菌種的血清型見(jiàn)表2

                      表2斯特氏菌菌種的血清型

中文菌名             學(xué)名               血清型
單核細胞增生李斯特氏菌L．monocylogenes1/2A,1/2B,1/2C,3A,3B,3C,4AB,4B,4C,4D,4E,7綿羊李斯特氏菌 L.ivanavit       5
英諾克李斯特氏菌 L.innocna       4AB,6A,6B,Un
威爾李斯特氏菌 L.welshimeri  6A,6B
西爾李斯特氏菌 L.seeligeri  1/2B,4C,4D,6B,Un
格氏李斯特氏菌 L.grayi
Un——未命名

7 菌量控制
每次檢驗均需用標準陽(yáng)性菌株和陰性菌株（如桿菌和鏈球菌等）進(jìn)行質(zhì)量控制，在6.2樣品置備的同時(shí)，在一個(gè)作為空白對照的FB1增菌液中加入新鮮配制的每毫升含有10個(gè)~100個(gè)單核細胞增生李斯特氏菌的陽(yáng)性標準菌株培養物稀釋液1ml，和陰性菌株培養物，按檢驗程序進(jìn)行同步檢驗。
8 報告結果
8.1 協(xié)同溶血試驗、血清學(xué)試驗可根據需要進(jìn)行，常規檢驗可不進(jìn)行這些試驗。
8.2 單核細胞增生李斯特氏菌與其他李斯特氏菌種的鑒別見(jiàn)表1
8.2.1 報告陽(yáng)性結果：檢出單核細胞增生李斯特氏菌。
8.2.2 報告陰性結果：未檢出單核細胞增生李斯特氏菌。   
   

 

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