進(jìn)出口行業(yè)標準-出口食品沙門(mén)氏菌屬(包括亞利桑那菌)——2

4鑒定
4.1篩選試驗
4.1.1每個(gè)瓊脂平板至少應挑選2個(gè)典型或可疑菌落,分別用接種針接種賴(lài)氨酸脫羧酶培養基或尿素酶瓊脂一管,接種后無(wú)須滅菌接種針,直接再接種三糖鐵瓊脂一管于37℃培養24±2h。
4.1.2　挑取菌落后的瓊脂平板,應置于4～8℃至少保留24 h,以備必要時(shí)復查。
4.1.3　按表2或表3結果進(jìn)行判斷。
                     表2　三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羥酶培養基篩選
三 糖 鐵 瓊 脂                 賴(lài)氨酸脫羧酶培養基         初步判斷
斜 面 底 層 產(chǎn) 氣 硫化氫
K A ＋(－) ＋(－) +              可疑沙門(mén)氏菌屬
K A ＋(－) ＋(－) -              可疑沙門(mén)氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) +              可疑沙門(mén)氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) -              非沙門(mén)氏菌屬
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－              非沙門(mén)氏菌屬
注: K—產(chǎn)堿; ＋—陽(yáng)性反應; (－)—少見(jiàn)反應；A—產(chǎn)酸; －—陰性反應; ＋/－─陽(yáng)性或陰性反應。
                     表3 三糖鐵瓊脂和尿素酶瓊脂篩選 
三 糖 鐵 瓊 脂                  尿素酶瓊脂   初步判斷
斜 面 底 層 產(chǎn) 氣 硫化氫
K A ＋(－) ＋(－) -   可疑沙門(mén)氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) -   可疑沙門(mén)氏菌屬
K A ＋(－) ＋(－) +   非沙門(mén)氏菌屬
A A ＋(－) ＋(－) +   非沙門(mén)氏菌屬
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－   非沙門(mén)氏菌屬
注: K—產(chǎn)堿; ＋—陽(yáng)性反應; (－)—少見(jiàn)反應；A—產(chǎn)酸; －—陰性反應; ＋/－─陽(yáng)性或陰性反應。
4.2 生化試驗
4.2.1 將符合表2或表3可疑沙門(mén)氏菌屬特性的三糖鐵瓊脂培養物,按表4進(jìn)行生化試驗 (表中賴(lài)氨酸脫羧酶試驗或尿素酶試驗的結果見(jiàn)4.1結果,不再另做)。
 表4 沙門(mén)氏菌屬生化反應
序 號 生 化 項 目          反 應
           沙門(mén)氏菌 亞利桑那菌
1 尿素酶試驗     -               -
2 V-P試驗              -               -
3 氰化鉀試驗     -               -
4 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗     +               +
5 吲哚試驗              -               -
6 丙二酸鈉試驗     -               +
7 衛矛醇試驗     d               -
注: ＋—陽(yáng)性反應；－—陰性反應；d—反應不定。 
4.2.2　所有生化試驗管均于37℃培養24±2 h。
4.2.3　生化試驗結果符合表4沙門(mén)氏菌屬特性的按4.3進(jìn)行。
4.3　血清學(xué)試驗
4.3.1　檢查培養物有無(wú)自凝性
在潔凈的玻片上加一滴生理鹽水,將待試培養物混合于生理鹽水滴內,使成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動(dòng)30～60 s,在黑色背景下觀(guān)察反應(最好用放大鏡觀(guān)察)。如菌體彼此相凝集成明顯或比較明顯小顆粒狀物,即認為有自凝性。反之無(wú)自凝性。
4.3.2　檢查“O”抗原
對無(wú)自凝性的培養物,按照4.3.1的程序進(jìn)行試驗,但以多價(jià)“O”血清代替生理鹽水, 在2min內判斷結果。如為陽(yáng)性結果以單價(jià)“O”血清進(jìn)行分群試驗。如為陰性結果,必要時(shí),可結合4.2結果按4.3.3進(jìn)行試驗,再以多價(jià)和單價(jià)“O”血清進(jìn)行試驗。 
4.3.3　檢查“Vi”抗原
按照4.3.1的程序進(jìn)行,但以“Vi”血清代替生理鹽水。
4.4　根據4.2和4.3試驗結果,按照表5進(jìn)行判定。 
                       表5　沙門(mén)氏菌屬生化試驗與血清學(xué)試驗結果判定
類(lèi)別          生化試驗         血清學(xué)試驗      其他試驗      判定
1    符合表4中沙門(mén)氏菌生化特性  "O"因子血清分群陽(yáng)性         沙門(mén)氏菌
2    符合表4中沙門(mén)氏菌生化特性  "O"因子血清分群陰性 菌落典型,
                                                    鏡檢革藍氏 沙門(mén)氏菌
                                                    陰性無(wú)芽胞桿菌
3    尿素酶試驗陽(yáng)性                  非沙門(mén)氏菌
4    尿素酶試驗陰性,表4生化反應 "O"因子血清分群陽(yáng)性              沙門(mén)氏菌
     3～5項中任一項不符合沙門(mén)氏菌
5   尿素酶試驗陰性,表4生化反應
    2～5項中任一項不符合沙門(mén)氏菌 "O"因子血清分群陰性             非沙門(mén)氏菌
6  尿素酶試驗陰性,表4生化反應
   2～5項中任二項或二項以上不符沙門(mén)氏菌                          非沙門(mén)氏菌
7  符合表4中亞利桑那菌生化特性   "O"因子血清分群陽(yáng)性 亞利桑那菌
  8符合表4中亞利桑那菌生化特性   "O"因子血清分群陰性  菌落典型, 亞利桑那菌
                                                      鏡檢革藍氏
                                                      陰性無(wú)芽胞桿菌
9 尿素酶試驗陽(yáng)性                     非亞利桑那菌
10  尿素酶試驗陰性,表4生化反應  "O"因子血清分群陽(yáng)性               亞利桑那菌
  3～5項中任一項不符合亞利桑那菌
11 尿素酶試驗陰性,表4生化反應    "O"因子血清分群陰性               非亞利桑那菌
   2～5項中任一項不符合亞利桑那菌
12  尿素酶試驗陰性,表4生化反應           非亞利桑那菌  2～5項中任二項或二項以上不符亞利桑那菌
注: ①丙二酸鈉試驗陰性,衛矛醇試驗反應不定的菌株,按上述1～6類(lèi)別結果進(jìn)行判斷。
②丙二酸鈉試驗陽(yáng)性,衛矛醇試驗陰性的菌株,按上述7～12類(lèi)別結果進(jìn)行判斷。
③如以上生化項目仍不能判定時(shí),可按P·R·愛(ài)德華,W·H·愛(ài)文:《腸桿菌科的鑒 定》(1978中譯本),擴大必要的生化試驗。結合血清學(xué)作綜合判定。    
   

 

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