我國進(jìn)出口檢驗行業(yè)標準-副溶血性弧菌檢驗方法——1.1

   5　增菌培養和分離 
5.1　對新鮮樣品,可選擇3個(gè)連續適宜的稀釋度,分別以1mL無(wú)菌吸管各吸取1mL稀釋液,  接種10mL單料氯化鈉多粘菌素B肉湯中,進(jìn)行選擇性增菌培養,每一稀釋度接種3 管(若選擇的稀釋度為接種1g樣品時(shí),則應以10mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液10  mL,接種10 mL雙料氯化鈉多粘菌素B肉湯中)。對經(jīng)加熱、輻射處理或冷藏、凍結的樣品,可按以上操作先將樣品接種于60  g/L氯化鈉蛋白胨水于37℃前增菌18～24h,然后將培養物以接種環(huán)轉種到氯化鈉多粘菌素B肉湯中進(jìn)行選擇性增菌。
5.2 37℃培養18～24 h。 
5.3　氯化鈉多粘菌素B肉湯管如有菌生長(cháng),則以3 mm直徑接種環(huán)分別取一環(huán)菌液,劃線(xiàn)于硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、膽鹽、蔗糖瓊脂(TCBS)平板上。 
5.4  37℃培養18～24 h。 
5.5　副溶血性弧菌在蔗糖瓊脂(TCBS)平板上的典型菌落呈圓形,邊緣整齊、濕潤、稍混濁、半透明,多數具尖心、斗笠狀,藍綠色菌落,直徑2～4mm。
6　生化鑒定  
6.1　在蔗糖瓊脂(TCBS)平板上如出現典型或可疑菌落,每個(gè)平板至少挑取兩個(gè)菌落,每個(gè)菌落分別順次接種到下列培養基進(jìn)行鑒別試驗。 
6.1.1　無(wú)鹽胰胨水。 
6.1.2 30g/L氯化鈉胰胨水。 
6.1.3　氯化鈉三糖鐵瓊脂:先穿刺后劃線(xiàn)。
6.2 37℃培養18～24 h。 
6.3　選取在氯化鈉三糖鐵斜面上產(chǎn)堿,在底層產(chǎn)酸,不產(chǎn)氣,不產(chǎn)硫化氫；在無(wú)鹽胰胨水中幾乎不生長(cháng),在30  g/L氯化鈉胰胨水中生長(cháng)旺盛的菌株進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢,副溶血性弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài),兩端濃染、無(wú)芽胞。如符合,  繼續進(jìn)行以下生化鑒定。
6.3.1　嗜鹽性試驗:各取一環(huán)30g/L氯化鈉胰胨水培養物,分別接種到70g/L及100g/L氯化鈉胰胨水中,37℃培養18～24  h。
6.3.2　細胞色素氧化酶試驗:取一環(huán)30g/L氯化鈉胰胨水培養物劃線(xiàn)到胰胨大豆瓊脂斜面上,37℃培養18～24 h。 
6.3.3　靛基質(zhì)試驗:在6.1.2的30 g/L氯化鈉胰胨水培養物中加靛基質(zhì)試劑后觀(guān)察反應。 
6.3.4　賴(lài)氨酸脫羧酶試驗:由氯化鈉三糖鐵斜面以接種針取少許培養物接種到賴(lài)氨酸試驗用培養基中,37℃培養18～24 h。 
6.3.5　精氨酸雙水解酶試驗:按上項同樣操作,將培養物接種到精氨酸試驗用培養基中, 37℃培養18～24h。
6.3.6  V-P試驗:以接種針由氯化鈉三糖鐵斜面取少許培養物穿刺V-P半固體瓊脂,37℃培養18～24h。在加V-P試劑前應先觀(guān)察動(dòng)力。沿穿刺線(xiàn)周?chē)�呈擴散性生長(cháng)為動(dòng)力陽(yáng)性。 
6.4　副溶血性弧菌生化特性的判定及進(jìn)一步試驗如下。
6.4.1　如所分離的菌株符合表1特性,按第7章報告結果。 
            　表1　副溶血性弧菌的生化特性 
鑒定程序         生 化 項 目 反應
初 篩        氯化鈉三糖鐵   
          斜面           產(chǎn)堿
          底層       產(chǎn)酸,不產(chǎn)氣 
         硫化氫            陰性
         嗜鹽性  
       無(wú)鹽胰胨水        幾乎不生長(cháng) 
    30 g/L氯化鈉胰胨水  生長(cháng)旺盛
生化鑒別  70  g/L氯化鈉胰胨水 明顯生長(cháng)
100 g/L氯化鈉胰胨水  幾乎不生長(cháng) 
    靛基質(zhì)             陽(yáng)性
     V-P                      陰性
    動(dòng)力                陽(yáng)性
細胞色素氧化酶             陽(yáng)性
賴(lài)氨酸脫羧酶             陽(yáng)性
精氨酸雙水解酶              陰性
擴大生化鑒別  42℃生長(cháng)             陽(yáng)性 
      蔗糖            不分解
     O/F試驗            發(fā)酵型
6.4.2如表1生化項目(擴大生化試驗項目除外)中,僅有一項生化試驗不符合時(shí),按以下步驟做進(jìn)一步鑒定
6.4.2.1　蔗糖分解試驗,42℃生長(cháng)試驗,O/F試驗。如仍符合副溶血性弧菌特性,可按第 7章報告結果,如其中有一項不符合,即可排除。 
6.4.2.2　副溶血性弧菌與有關(guān)細菌的鑒別可參考表2進(jìn)行。 　　　　　　
　　
                  表2　副溶血性弧菌與有關(guān)細菌鑒別表 
試驗 副溶血性 溶藻膠 鰻弧菌 創(chuàng )傷 河弧菌 麥氏弧菌 嗜水氣單胞菌 類(lèi)志賀鄰單胞菌
TCBS   -         -     +       -       -          - +
(藍綠色菌落)+       
42℃生長(cháng)　+ +    -    v       v          - -
鹽耐受性試驗(生長(cháng))
0％氯化鈉 - -    -    - -      -          + +
60g/L氯化鈉+ +    +    + +      +          - -
80g/L氯化鈉+ +    v    - +      v          - -
100g/L氯化鈉- +    -    - -      -          - -
賴(lài)氨酸脫羧酶+ +    -    + -      v          - +
精氨酸雙水解酶- -    v    - +      +          v +
鳥(niǎo)氨酸脫羧酶+ v    -    v -      -          - v
蔗糖發(fā)酵 - +    +    - +      +          v -
乳糖發(fā)酵  - -    -    + -      v          v v
甘露醇發(fā)酵+ +    +    v +      +          + -
阿拉伯糖發(fā)酵+ -    -    - +      -          v -
V-P試驗-          +    v    - -      +          v -
注:空白處表示未試驗；ｖ表示可變的。   
   
   
   

 

上一篇：我國行業(yè)標準-出口食品中霍亂弧菌檢驗方法——2.1

下一篇：出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法——1