我國進(jìn)出口檢驗行業(yè)標準-副溶血性弧菌檢驗方法——4

9.7　胰胨大豆瓊脂斜面(TSA)　　
胰　胨 　　　15.0g　　
植物蛋白胨 　5.0g　　
氯化鈉　　　 30.0g　　
瓊　脂 　　　15.0g　　
蒸餾水 1000mL　　
  將各成分加入水中,要不斷攪拌,加熱至煮沸1min。分裝于15mm×150mm試管,每管  3mL。121℃高壓滅菌15min后制成斜面,最終pH7.3±0.2。 　
試劑:　10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液　　　　　10g/Lα-萘酚乙醇溶液　　　　　 
  將配好后的10g/L鹽酸四甲基對苯二胺溶液置于密塞棕色玻璃瓶中,于5～10℃存放。此試劑極易氧化,宜現用現配。試驗時(shí),取37℃18～24h的胰胨大豆瓊脂斜面培養物1支。將兩種試劑各2～3滴從斜面上端流下,2min內呈現藍色者為細胞色素氧化酶試驗陽(yáng)性。 
9.8　靛基質(zhì)試驗用培養基(I)　　培養基同9.6的30g/L氯化鈉胰胨水�！　�
靛基質(zhì)試劑〔柯凡克(KOVAS)氏試劑〕:　　
對二甲氨基苯甲醛 10.0g 　　
純戊醇 　　150.0mL 　　
濃鹽酸　　 60.0mL 　　
  將試劑溶于戊醇中,然后慢慢加鹽酸,加熱至60℃后,呈深黃色,靜置6～7h,變成黃色即可使用。試液宜小量配制,冰箱保存。久存后,試液變?yōu)辄S褐色,不可繼續使用�！　�
在30g/L氯化鈉胰胨水18～24h培養液中,滴加柯凡克試液0.1mL。出現紅色環(huán)者為陽(yáng)性,出現黃棕色環(huán)者為陰性。 
9.9　氨基酸試驗用培養基 
9.9.1　賴(lài)氨酸脫羧酶培養基(LD)　　
酵母浸膏　 3.0g　　
葡萄糖　　 1.0g　　
氯化鈉 　　30.0g　　
L-賴(lài)氨酸　  5.0g　　
溴甲酚紫　 0.016g　　
蒸餾水　　 1000mL 　　
  除溴甲酚紫外,將各成分加入蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約10min,加熱至完全溶解,調至pH6.7±0.1。分裝于10mm×100mm試管,每管1mL。121℃高壓滅菌10min。滅菌后應立即取出放涼,接種培養后,培養基顏色變?yōu)樯钭仙�的為�?yáng)性反應,變?yōu)辄S色的,為陰性反應。 
9.9.2　精氨酸雙水解酶試驗用培養基(AD)　　基礎培養基同賴(lài)氨酸脫羧酶試驗用培養基,精氨酸加入量同賴(lài)氨酸量。
9.10 V-P半固體瓊脂(VP) 　　
酵母浸膏　 1.0g　　
蛋白胨 12.0g　　
葡萄糖 10.0g　　
氯化鈉 30.0g　　
瓊　脂 3.0g　　
蒸餾水 1000mL 　　
  將各成分加入蒸餾水中,靜置約10 min,攪拌、加熱至溶解。調pH7.3±0.1,分裝于  10mm×100mm試管,每管1mL,121℃高壓滅菌10min。滅菌后,立即取出放涼�！　�
V-P試劑:　　
甲液:α-萘粉　 6.0g　　　　　
純乙醇  100.0mL　　
乙液:氫氧化鉀 40.0g　　　　　
肌　酸　 0.3g　 　　　　
蒸餾水 100.0mL 　　
  先將氫氧化鉀溶于水中,再加入肌酸�！　�
以上試劑保存于冰箱中,可使用兩個(gè)月。試驗時(shí),分別加甲液0.2mL(約6滴)和乙液  0.1mL(約3滴)。加入試劑后呈現紅色者為陽(yáng)性,銅色為陰性。對陰性結果1h后再做一次檢查。9.11 糖類(lèi)分解試驗用培養基　　
蛋白胨 　　10.0g 　　
牛肉浸膏　 3.0g　　
氯化鈉 　　30.0g　　
溴甲酚紫　 0.04g　　
蒸餾水　　 1000mL 　　
  除溴甲酚紫外,將各成分加熱溶解,按1％量加入糖類(lèi)。調至pH7.0±0.2,加入溴甲酚紫。分裝于10mm×100mm試管,每管1mL,112℃高壓滅菌15min。 
9.12 42℃生長(cháng)試驗用培養基　　
胰　胨 　　　17.0g　　
大豆胨　　　 3.0g　　
氯化鈉 　　　30.0g　　
磷酸氫二鉀　 2.5g　　
葡萄糖　　　  2.5g　　
蒸餾水 　　　1000mL 　　
  除葡萄糖外,將各種成分混合溶解,煮沸1～2min,加入葡萄糖。調至pH7.3±0.2。分裝于15mm×150mm試管,每管7mL,121℃高壓滅菌15min。 
9.13 O/F試驗用培養基(HLGB)　　
蛋白胨　　 2.0g　　
酵母浸膏　 0.5g　　
氯化鈉 　　30.0g　　
葡萄糖 　　10.0g　　
溴甲酚紫　  0.015g　　
瓊　脂 　　3.0g　　
蒸餾水　　 1000mL　　
  將各成分(除溴甲酚紫外)加于蒸餾水中加熱溶解,調至pH7.4,加入溴甲酚紫,混勻,  分裝于15mm×150mm試管,每管3mL,121℃高壓滅菌15min。 　 　　
  本培養基用于鑒別革蘭氏陰性細菌對于葡萄糖的發(fā)酵型和氧化型代謝作用。將同一菌株接種于2 支該培養基中,其中一支管的培養基上面加滅菌礦物油脂來(lái)隔離氧氣,而另一支管不加。這樣發(fā)酵型細菌在兩管培養基中均產(chǎn)生酸性反應,氧化型細菌則在未加礦物油脂的管中產(chǎn)生酸性反應,而在加油脂的培養管中只有輕度或者不生長(cháng)也無(wú)反應變化。 
9.14 神奈川現象試驗用我妻氏瓊脂(WA)　　
酵母浸膏　　 3.0g　　
蛋白胨 　　　10.0g　　
氯化鈉 　　　70.0g　　
磷酸氫二鉀　 5.0g　　
甘露醇 　　　 10.0g　　
結晶紫　　　　0.001g　　
瓊　脂 　　　15.0g　　
蒸餾水 　　　1000mL　　
  調至pH8.0(不必高壓),加熱30min,待冷至50℃,按5％的體積輕輕加入事先準備好的以生理鹽水洗三次的新鮮人或兔血球�；旌暇鶆騼A注平皿,充分干燥后使用 �！　�
注:新制備的培養基均應用已知陽(yáng)性及陰性菌進(jìn)行測試,以保證培養基質(zhì)量�！　�
如要求一定量樣品中不得有副溶血性弧菌,則可將樣品接種于9倍量的60g/L氯化鈉蛋白胨水(前增菌)或多粘菌素B肉湯(直接增菌),以下操作按上列程序進(jìn)行。    
   

 

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