我國行業(yè)標準-出口食品中霍亂弧菌檢驗方法——1

6、檢驗步驟_檢驗步驟見(jiàn)圖所示.(略)
6.1增菌
   稱(chēng)取檢樣25g，加入裝有225mL堿性蛋白胨水（APW）的廣口瓶?jì)�。固體樣品應以均質(zhì)器9000r/min~10000r/min打碎，或以剪刀充分剪碎。（36±1）℃培養6h~8h和16h~24h。
   如為牡蠣樣品，應同樣制備另一份檢樣，置于A(yíng)PW中，42℃培養6h~8h和16h~24h。
6.2分離
   以3mm~5mm接種環(huán)取6h~8h和16h~24h增菌培養液的表面生長(cháng)物一環(huán)分別劃線(xiàn)家終于TCBS瓊脂平板至少各一個(gè)，于（36±1）℃培養18~24h。
   在TCBS瓊脂上，典型的霍亂弧菌菌落為大的，光滑，黃色，稍平，具有不透明中心和半透明的邊緣。
6.3初步鑒定
6.3.1用接種環(huán)挑取TCBS瓊脂平板上2~5個(gè)可疑菌落，劃線(xiàn)于T1N1瓊脂平板上，（36±1）℃培養12h~18h。
6.3.2以無(wú)菌白色濾紙沾取T1N1瓊脂表面培養物，滴加氧化酶試劑進(jìn)行氧化酶試驗。
6.3.3以無(wú)菌環(huán)取氧化酶陽(yáng)性的培養物于0.5%去氧膽酸鈉液試劑滴中，進(jìn)行粘絲試驗。
6.3.4以接種針取氧化酶和粘絲試驗陽(yáng)性的培養物，接種TSI、KIA和AGS，穿刺底層并劃線(xiàn)斜面。
6.3.5以接種針取上項相同培養物接種T1N0和T1N3肉湯。
6.3.6將TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉湯于（36±1）℃培養18h~24h。
表1 霍亂弧菌與相關(guān)細菌在初步鑒定試驗中的反應

                KIA TSI AGS T1N0 T1N3
             斜面 底層 斜面  底層 斜面 底層
霍亂弧菌      K    A  A(K少見(jiàn))A    K    a      +         +
擬態(tài)弧菌      K    A  K(A少見(jiàn))A    K    A      +         +
副溶血性弧菌  K    A    K     A    K    A      -         +
溶藻弧菌      K    A    A     A    K    A      -         +
創(chuàng )傷弧菌     K或A  A K(A少見(jiàn)) A    K    A      -         +
嗜水氣單胞菌 K或A  A  K或A    A    K    K      +         -
類(lèi)志賀鄰單胞菌K或A A  K或A    A   ND   ND  +         -
注：K—堿性；A—酸性；a—微酸性；ND—未鑒定。
    弧菌屬細菌在TSI、KIA、AGS中不產(chǎn)生H2S,也不產(chǎn)氣。一些契單胞菌屬菌株可能產(chǎn)氣。
6.4 確認試驗
    以接種環(huán)取初步鑒定試驗符合霍亂弧菌反應的T1N3培養物，分別接種到以下培養基：
    Hugh—Leifson葡萄糖肉湯(HLGB)，（36±1）℃培養18h~24h。
    ONPG胨水，（36±1）℃培養，1h~3h或24h。
    賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯，（36±1）℃培養24h~96h。
    阿拉伯糖肉湯，（36±1）℃培養24h。
    O/129試驗用培養基，（36±1）℃培養18h~24h。
                表2   霍亂弧菌的生化性狀
    生化項目 生化性狀      生化項目 生化性狀
     TCBS            Y          D－甘露醇        ＋
      AGS           Ka            氧化酶         ＋
   NaCl  0％         ＋            ONPG          ＋
3％         ＋           V－P           v
6％         －         精氨酸雙水解酶   －
8％         －         賴(lài)氨酸脫羧酶     ＋
10％        －         鳥(niǎo)氨酸脫羧酶     ＋
     42℃生長(cháng)        ＋           抑菌試驗       
      蔗糖           －           10μgO/129      S
   D-纖維二糖        －           150μgO/129     S 
     乳糖            －            明膠酶        ＋
   阿拉伯糖          －            尿素酶        －
  D－甘露糖    ＋
注：Y－黃色；K－堿性；a－微酸性；＋－80％或更多的菌株陽(yáng)性；v－依據種或菌株的可變反應；S－敏感；AGS－精氨酸-葡萄糖斜面。
    所有試驗均不產(chǎn)硫化氫和氣體。    
      
   

 

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