中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標準出口食品嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數、平酸芽孢和厭氧芽孢)計數方法

1　主題內容與適用范圍　
本標準規定了出口食品嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數、平酸芽孢和厭氧芽孢)的計數方法�！”緲藴蔬m用于谷物產(chǎn)品和食品配料嗜熱菌芽孢計數。
其他食品可參照使用。 
2　設備和材料 
2.1　取樣工具：刮勺、取樣鏟等。 
2.2　帶蓋樣品瓶或容器。 
2.3　高壓蒸汽滅菌鍋。 
2.4　天平: 感量0.01g。
2.5　均質(zhì)器和1000mL帶蓋均質(zhì)杯。 
2.6　移液管：容量1mL、10mL(大口徑)。
2.7　培養皿：內徑90mm。 
2.8 250mL三角燒瓶：具100mL刻度線(xiàn)。 
2.9　水浴箱：溫度45～48℃。
2.10 酒精燈。 
2.11 菌落計數器。
2.12 培養箱：溫度55±2℃。
2.13 蒸汽柜。 
3　培養基 
3.1　葡萄糖胰蛋白胨瓊脂。 
3.2　覆蓋瓊脂。 
3.3　改良亞硫酸鹽瓊脂。
3.4　肝湯。 
4　樣品制備 
4.1　谷物：將50g樣品放入滅菌均質(zhì)杯內,加入200mL滅菌蒸餾水, 以8000～10000r/min均質(zhì)3min,使成均勻的混懸液。
4.2　淀粉或面粉：將20g樣品放入盛有適量玻璃珠的250 mL滅菌三角燒瓶?jì)?加滅菌蒸餾水至100mL刻度線(xiàn),振搖,使成均勻的混懸液。 
4.3　糖：將20 g干態(tài)糖或相同糖含量的液態(tài)糖(根據白利度確定。如29.41g、68白利度的液態(tài)糖相當于20g干態(tài)糖)放入250mL滅菌三角燒瓶?jì)?加滅菌蒸餾水至100mL刻度線(xiàn),攪拌使溶解,迅速加熱至沸并維持5min,立即用水冷卻。
5　接種培養和計數
5.1　需氧嗜熱芽孢總數
5.1.1　谷物、淀粉或面粉:用大口徑移液管移取20 mL谷物混懸液或10 mL淀粉或面粉混懸液,在攪拌狀態(tài)下加入盛有100mL融化的葡萄糖胰蛋白胨瓊脂(55～60℃)的250mL三角燒瓶?jì)�。將此混合物在沸水或蒸汽柜中放�?5 min。輕微攪拌使盡快冷卻,再將全部混合物等量?jì)A注至5個(gè)滅菌培養皿內。凝固后于其表面覆蓋一薄層2％滅菌瓊脂 (防止蔓延型菌落出現),待覆蓋瓊脂凝固后,倒置培養皿于55℃保持一定濕度培養48 h。
5.1.2　糖：于5個(gè)滅菌培養皿內各放入2 mL經(jīng)熱處理的糖溶液,傾入葡萄糖胰蛋白胨瓊脂(55～60℃),輕輕搖動(dòng),使樣液與培養基混合均勻。待凝固后,倒置培養皿于55℃保持一定濕度培養48h。
5.1.3　計數5個(gè)平板上的菌落。5個(gè)平板上的菌落數相加,再乘以2即為10 g谷物中的需氧嗜熱芽孢總數。如樣品為淀粉或面粉或糖,則5個(gè)平板上的菌落數相加,再乘以5即為10g樣品中的需氧嗜熱芽孢總數。
5.2　平酸芽孢
5.2.1 對上述5.1.1和5.1.2條中的平板再進(jìn)行檢查。計數平板上直徑1～5mm,中心有不透明暗色斑點(diǎn)的圓形菌落。在紫色平板上,平酸菌菌落通常被黃色暈圈圍繞著(zhù)。當接種菌過(guò)多(整個(gè)平板呈淡黃色)或產(chǎn)低酸的菌株存在時(shí),黃色暈圈不明顯或消失。表面以下的菌落致密,兩面凸出,近乎針尖狀。如對表面以下菌落有懷疑,可挑取此菌落劃線(xiàn)培養于葡萄糖胰蛋白胨瓊脂平板上,以證實(shí)表面菌落的特征。
5.2.2　樣品中平酸芽孢的計算同上述5.1.3條。 
5.3　產(chǎn)硫化氫厭氧芽孢 
5.3.1　將20 mL樣品混懸液分裝于6 支剛剛排氣的改良亞硫酸鹽瓊脂試管內。如樣品為谷物、淀粉或面粉,應旋緊試管帽,在加熱(在沸水或蒸汽柜中放置15 min)之前和加熱過(guò)程 中輕輕顛倒試管數次,加熱后迅速用水冷卻試管。預熱試管至55℃, 并在此溫度下培養48h。5.3.2　產(chǎn)硫化氫厭氧菌在改良亞硫酸鹽培養基中形成烏黑發(fā)亮的特殊球形區域,開(kāi)明顯氣體產(chǎn)生。某些不產(chǎn)硫化氫厭氧菌產(chǎn)生大量氫氣和還原亞硫酸鹽,引起瓊脂斷裂和使整個(gè)培養基變黑。但是,這種情況易與上述的黑色球形區域分開(kāi)。計數6 支試管中的黑色球形區域。6支試管中的黑色球形區域數相加,再乘以2即為10g谷物中的產(chǎn)硫化氫厭氧芽孢數。如樣品為淀粉或面粉或糖,則6支試管中的黑色球形區域數相加,再乘以2.5即為10g樣品中的產(chǎn)硫化氫厭氧芽孢數。
5.4　不產(chǎn)硫化氫厭氧芽孢
5.4.1　將20 mL樣品混懸液分裝于 6支剛剛排氣的肝湯試管內。如樣品為谷物、淀粉或面粉,應立即旋緊試管帽,在加熱(在沸水或蒸汽柜中放置15 min)之前和加熱過(guò)程中搓轉試管數次。加熱后迅速用水冷卻,并于各試管內注入50℃滅菌覆蓋瓊脂,厚度5～6cm。待瓊 脂凝固后,預熱試管至55℃,并在此溫度下培養48～72 h。
5.4.2　瓊脂斷裂,產(chǎn)酸,偶爾伴有干酪氣味,被判定為不產(chǎn)硫化氫厭氧菌。此方法適用于定性試驗或作粗略定量估計,不能以單位樣品中芽孢數表示結果。    
   

 

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