中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標準 出口食品中產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌——2

附　錄 A　　培養基和試劑的配制(補充件)
A1　胰(月示)-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸(TSC)瓊脂　　
胰(月示)                              15.0g　　
大豆胨 　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
偏亞硫酸氫鈉[sodium bisulfite(meta)]   1.0g　　
檸檬酸鐵銨　　　　　　　　　　　　　　 1.0g　　
瓊脂                                   20.0g　
　加蒸餾水稀釋到1000mL，調至pH7.6±0.1，分裝到500mL燒瓶中，每瓶250mL。121℃高壓滅菌15min，倒平皿前，每250mL培養基(50℃)中，加過(guò)濾除菌的0.5％ D-環(huán)絲氨酸溶液20.0mL�！�
　制作卵黃平板：加50％卵黃乳液20 mL到250 mL含D-環(huán)絲氨酸培養基中，傾注到無(wú)菌平皿中，每皿約15mL。使用前應將平皿置室溫使其干燥。
A2　D-環(huán)絲氨酸溶液　
　溶解1gD-環(huán)絲氨酸于200 mL磷酸鹽緩沖液(c＝0.05mol/L)(pH8.0±0.1)中(不加熱)，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾除菌。
A3　卵黃乳液　
　用硬刷刷洗鮮蛋，瀝干，放70％乙醇中浸泡1h。以無(wú)菌操作取出蛋黃，加等體積無(wú)菌0.8％氯化鈉溶液，混合置4℃貯存。
A4　緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養基　　　
牛肉膏　　　　　　　　　　　　　　　　3.0g　　　
蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
硝酸鉀　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 　　              2.5g　　　
半乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
甘油　　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
瓊脂                                  3.0g　
　用蒸餾水溶解并稀釋到1000mL。調至pH7.3±0.1，分裝試管，每管11mL。121℃高壓滅菌15min。
A5　乳糖-明膠培養基　　　
胰(月示)　　　　　　　　　　　　　 　15.0g　　　
酵母膏                               10.0g　　　
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　 10.0g　　　
磷酸氫二鈉(Na2HPO4)　　              5.0g      
酚紅　　　　　　　　　　　　　　　　 0.05g　　 
明膠                                  120.0g　
　用蒸餾水溶解并稀釋到1000mL，調至pH7.5±0.1，加入乳糖和酚紅。分裝試管，每管10 mL。121℃高壓滅菌15min。
A6　產(chǎn)芽孢肉湯　　
多價(jià)胨(polypeptone)                      15.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　 3.0g　　
可溶性淀粉　　　　　　　　　　　　　　　 3.0g　　
硫酸鎂                                   0.1g　　
硫乙醇酸鈉　　　　　　　　　　　　　　　 1.0g　　
磷酸氫二鈉(Na2HPO4)                      11.0g　
　用蒸餾水溶解稀釋到1000mL，調至pH7.8±0.1，分裝試管，每管15 mL。121℃高壓滅菌15min。
A7　多價(jià)蛋白胨-酵母膏(PY)培養基　　
多價(jià)胨                                   20.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
氯化鈉　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　
　用蒸餾水溶解并稀釋到1000mL, 調至pH6.9±0.1, 分裝到帶螺帽的試管內,每管9mL。121℃高壓滅菌15 min。
A8　硫乙醇酸鹽液體培養基　　
胰酪胨                                   15.0g　　
L-胱氨酸　　　　　　　　　　　　　　　　 0.5g　　
氯化鈉　　　　　　　　　　　　　　　　　 2.5g　　
葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
硫乙醇酸鈉(或硫乙醇酸)　　　　　　　　　 0.5g　　
刃天青鈉溶液(1:1000)(新鮮配制)　　　　　 1 mL　　
瓊脂                                     0.75g　
　將胱氨酸、氯化鈉、葡萄糖、酵母膏和胰胨同1000mL蒸餾水混合，并在阿諾氏消毒器或蒸氣浴中加熱，直至完全溶解，并加入硫乙醇酸鈉或硫乙醇酸溶液，使溶解。如必要可用1mol/L氫氧化鈉調整pH，使消毒后的pH在7.1±0.2，加刃天青鈉溶液，混合，將培養基分裝到150mm×16mm螺旋蓋試管內，每管10mL，121℃高壓滅菌20min。
A9　蛋白胨水　
　在2000 mL蒸餾水中溶解蛋白胨2.0g，調至pH7.0±0.1。在200 mL瓶中分裝90 mL，在500 mL錐形瓶中分裝225 mL。121℃高壓滅菌15min。
A10 亞硝酸鹽試劑
a．試劑甲　　在1000mL 5mol/L乙酸中溶解對氨基苯磺酸8g；
b. 試劑乙　　在1000mL 5mol/L乙酸中溶解α-萘酚5g。
A11 緩沖甘油-氯化鈉溶液　
　在900mL蒸餾水中溶解氯化鈉4.2g，加無(wú)水磷酸氫二鉀12.4g，無(wú)水磷酸二氫鉀4.0g和甘油100mL，混合，充分溶解。調至pH7.2。121℃高壓滅菌15min�！�
　配制雙料緩沖甘油溶液(20％)時(shí)，用甘油200mL和蒸餾水800mL。   
   

 

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