出口畜產(chǎn)品中炭疽桿菌檢驗方法——3

A5 洗樣液
吐溫-20 2.5mL
蒸餾水 1 000mL
將吐溫-20加于蒸餾水中,充分攪勻,分裝于三角燒瓶或試劑瓶?jì)?121℃高壓滅菌。貯存于 0～4℃冰箱,備用。
A6 生理鹽水
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000.00mL
待氯化鈉完全溶解后,分裝于三角燒瓶或試劑瓶?jì)?121℃高壓滅菌 20min。
A7 緩沖生理鹽水
無(wú)水磷酸氫二鈉 1.42 g
氯化鈉 8.50 g
蒸餾水 1 000.00 mL
將各成分加于蒸餾水中,加熱攪拌使完全溶解。如欲長(cháng)期保存,可加 0.1g硫柳汞(最終濃度為 0.01％)。
A8 固定液
無(wú)水乙醇 600 mL
三氯甲烷 300 mL
甲醛溶液(36％～38％) 100 mL
將三種成分混勻,貯存于磨砂口帶蓋試劑瓶?jì)取?br>A9 炭疽桿菌噬菌體γ或 ω型的均可使用。
A10 革蘭氏染色液及染色方法
A10.1 Hucker 氏結晶紫液
A液：結晶紫(或龍膽紫) 2.0g�� 
     乙醇(95％) 20.0mL
B液：草酸銨 0.8g
     蒸餾水 80.0 mL
將 A、B兩液混勻,放置 24 h后,用粗濾紙過(guò)濾。貯于磨砂口滴瓶?jì)取?#160;
A10.2 革蘭氏碘液碘 1.0 g碘化鉀 2.0 g蒸餾水 300.0 mL 將碘和碘化鉀放于乳缽內,研成細粉。先后分三次分別加蒸餾水1mL 、5mL和10 mL,繼續研磨至完全溶解,倒入褐色瓶中。再加水將殘留于乳缽的碘液洗入瓶中,補加蒸餾水至300mL。
A10.3 脫色劑95％乙醇 適量貯于磨砂口滴瓶中。
A10.4 Hucker氏復染液(貯備液)沙黃 O 2.5 g乙醇(95％) 100mL臨用時(shí),取適量貯備液,加蒸餾水稀釋成 1:10稀釋液。
A10.5 染色方法
a. 于載玻片上制備涂膜,自然干燥；
b. 將玻片浸入固定液內,固定 1 min；
c. 加結晶紫于涂膜上,染色 1 min；
d. 用水沖去染色液,淋去多余的水； 
e. 加革蘭氏碘液于涂膜上,媒染 1 min；
f. 用水沖去碘液；
g. 連續加 95％乙醇流過(guò)涂膜,至無(wú)紫色脫掉；
h. 用水沖洗玻片,淋去多余的水；
i. 加復染液于涂膜上,染色 10～30 s；
j. 用水沖去染色液；
k. 用吸墨紙吸干水分或自然干燥；
l. 鏡檢。
A11 大豆凝集素稀釋液按試劑使用說(shuō)明制備工作稀釋液,貯于 4℃冰箱備用。
附加說(shuō)明：本標準由中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗局提出。本標準由中華人民共和國內蒙古進(jìn)出口商品檢驗局負責起草。本標準主要起草人甄宏太、周云霞
中華人民共和國國家進(jìn)出口商品檢驗局 1994-12-26批準 1995-05-01實(shí)施   
   

 

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