出口食品平板菌落計數——1

                     出口食品平板菌落計數
             中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標準 SN 0168-92
代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export    
1　主題內容與適用范圍　
　本標準規定了出口食品平板菌落計數的方法�！　�
  本標準適用于各種出口食品及其原料,有專(zhuān)門(mén)規定檢驗方法的除外。
2　設備和材料
2.1 工作臺：超凈工作臺或放于清潔、光線(xiàn)充足的實(shí)驗室里的水平工作臺。瓊脂平板在工作臺上暴露15 min,每平板不得超過(guò)15個(gè)菌落。
2.2　恒溫培養箱：36±1℃。
2.3　恒溫水浴箱：45±1℃。
2.4　均質(zhì)器。 
2.5　振蕩器。
2.6　吸管：1、10和25mL,具0.1mL刻度。
2.7　平皿：直徑為90 mm。
2.8　稀釋瓶：廣口瓶或三角燒瓶,容量為200 mL和500 mL。
2.9　玻璃珠：直徑為5mm左右。 
2.10 天平：感量0.1g。
3　培養基和試劑 
3.1　平板計數瓊脂。
3.2 75％乙醇。
3.3　稀釋劑：磷酸鹽緩沖稀釋液。
4　操作程序 
4.1　樣品制備 
4.1.1　以無(wú)菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內,如有包裝,則用75％乙醇在包裝開(kāi)口處擦拭后取樣。
4.1.2　制備樣品勻液
4.1.2.1　固體或半固體食品：以無(wú)菌操作取25 g樣品,放入裝有225mL稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內,于8000r/min均質(zhì)1～2min,制成1:10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過(guò)2min,應在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。
4.1.2.2　干燥或干粉食品：以無(wú)菌操作取25 g樣品,放入裝有225mL稀釋劑和適量玻璃珠的500 mL稀釋瓶中。迅速振搖,將樣品混勻,制成1 : 10的樣品勻液。振搖時(shí),幅度為30cm,7s內振搖25次,也可用機械振蕩器振蕩15s代替手搖。
4.1.2.3　液體食品: 用滅菌吸管吸取25mL樣品, 放入裝有225mL稀釋劑的500mL稀釋瓶中,按4.1.2.2條中所述方法迅速振搖,制成1:10的樣品勻液。吸取樣品時(shí),吸管插入液面下不要超過(guò)2.5cm。吸管內液體要在2～4s內完全排入稀釋劑中。不要在稀釋劑中吹洗吸管。
4.2　稀釋樣品勻液 
4.2.1　用10 mL滅菌吸管準確吸取1:10的樣品勻液10 mL,放入裝有90 mL稀釋劑的200mL, 稀釋瓶中。按4.1.2.2條中所述的方法,迅速振搖。制成1:100的樣品液。從容器中吸取樣品勻液和以后的稀釋操作中,吸管尖不要碰著(zhù)瓶口。吸入的液體應先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端離開(kāi)液面并貼在容器內壁將液體調至所要求的刻度。
4.2.2　分別用10mL滅菌吸管按4.2.1條所述方法將樣品勻液制成10倍遞增稀釋的樣品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。
4.3　平板接種
4.3.1　對于每一個(gè)樣品,選用合適的三個(gè)連續稀釋度的樣品液進(jìn)行平板計數。 
4.3.2　分別用滅菌吸管吸取1mL樣品液放入作了適宜標志的平皿內。每個(gè)稀釋度的樣品液用兩個(gè)平皿。如果某一樣品液在取出供試部分前的放置時(shí)間超過(guò)3 min,應按4.1.2.2條所述方法再振搖該樣品液。
4.3.3　分別加12～15mL平板計數瓊脂(已放45＋1℃的水浴中恒溫)到各平皿內。立即將平皿內的樣品液和瓊脂培養基充分混合�；旌戏椒ㄊ菍⑵矫髢A斜和旋轉。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。同時(shí)將平板計數瓊脂傾入加有1 mL稀釋劑的另一滅菌平皿作空白對照。將樣品液加入平皿后應立即傾注瓊脂培養基,每個(gè)樣品從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過(guò)20min。
4.4　培養
待瓊脂凝固后將平皿翻轉,立即放進(jìn)36±1℃的恒溫培養箱內培養48±2h。培養箱應 保持一定的濕度,經(jīng)48h培養的瓊脂培養基的失重不得超過(guò)15％。
4.5　菌落計數和記錄
4.5.1　培養后,立即計數每個(gè)平板上的菌落數。25～250個(gè)菌落為合適范圍。如果不能立即計數,應將平板存放于0～4℃,但不得超過(guò)24 h。 
4.5.2　如只有一個(gè)稀釋度的兩個(gè)平板上的菌落在合適范圍內, 先計算兩個(gè)平板的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每克(毫升)樣品中平板菌落數(下表,樣品1)。
4.5.3　如有兩個(gè)稀釋度在合適范圍內,先計算每個(gè)稀釋度兩個(gè)平板的平均值,再計算兩個(gè)稀釋度的平均值,然后計算每克(毫升)樣品中平板菌落數(下表,樣品2)。
4.5.4　當最低稀釋度的兩個(gè)平板上都少于25個(gè)菌落時(shí),計數這一稀釋度兩個(gè)平板上的實(shí)際菌落數,計算兩個(gè)平板上的平均菌落數,將平均菌落數乘以稀釋倍數,得到估計的平板菌落數。給這個(gè)數注上星號(*), 表明該數系從菌落數在25～250這一范圍之外的平板估計所得(下表,樣品3)。
4.5.5　當所有平板上的菌落都超過(guò)250時(shí),則應將最高稀釋度的兩個(gè)平板的平均菌落數乘以稀釋倍數,得到估計的平板菌落數。給這個(gè)數注上星號(*) (意義同4.5.4)(下表,樣 品4)。4.5.6　如果所有稀釋度的平板都沒(méi)有菌落,則以小于1乘以最低稀釋倍數報告平板菌落數。給這個(gè)數注上星號(*) (意義同4.5.4條) (下表,樣品5)。
4.5.7　同一稀釋度的兩個(gè)平板中,一個(gè)有25～250個(gè)菌落,另一個(gè)的菌落多于250個(gè),兩個(gè)平板都要計數。計算方法同4.5.2條(下表,樣品6)。
4.5.8　兩個(gè)連續稀釋度中的每個(gè)稀釋度都有一個(gè)平板的菌落數在25～250個(gè)范圍內,而另一個(gè)的菌落數高于250或低于25,四個(gè)平板都要計數。計算方法參照4.5.2條和4.5.3條(下表,樣品7)。 
4.5.9　某稀釋度的兩個(gè)平板都有25～250個(gè)菌落,而另一稀釋度的兩個(gè)平板中只有一個(gè)平板的菌落數在 25～250范圍內。四個(gè)平板都要計數,計算方法參照4.5.2條和4.5.3條 (下表,樣品8、9)。
4.5.10 蔓延生長(cháng)菌落 通常有三種不同類(lèi)型的蔓延生長(cháng)菌落。第一種類(lèi)型是鏈狀菌落,菌落之間沒(méi)有明顯界線(xiàn),這些菌落是當瓊脂和試驗物混合時(shí),一個(gè)細菌塊被分散所致；第二種類(lèi)型是在瓊脂和 平皿底之間形成的水膜樣菌落；第三種是在平皿邊緣或瓊脂表面形成的水膜樣菌落。如果所選擇的平板出現過(guò)量的蔓延菌落生長(cháng),以致a.被蔓延菌落蓋住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生長(cháng)區面積超過(guò)平板面積的50％,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生長(cháng)區面積超過(guò)平板面積的25％,這樣的平板報告為“蔓延菌落”,不予計數。計數其他平板上的菌落數,將這些數值的算術(shù)平均值報告為平板菌落數（下表,樣品10）。當有必要計數除以上a.和b.外的蔓延生長(cháng)菌落時(shí),將三種不同類(lèi)型的蔓延菌落分別計數。對于第一種類(lèi)型,如果僅有一條鏈,將它作為一個(gè)菌落計。如果有來(lái)源不同的幾條鏈, 將每條鏈作為一個(gè)菌落計,不要把鏈上生長(cháng)的各個(gè)菌落分開(kāi)來(lái)數。第二種和第三種類(lèi)型的蔓延生長(cháng)形成易于鑒別的菌落,即按一般菌落計數,把計數的蔓延生長(cháng)菌落數同一般菌落數加在一起,計算平板菌落數。
4.5.11 操作者對同一平板復核自己的計數結果,其差異應在5％之內,而其他人對這一平板重復計數,其差異應在10％之內。否則,應找出原因,加以校正。 
4.6　計算和記錄數字適宜稀釋度的兩個(gè)平板的菌落數平均值或兩個(gè)稀釋度的平板菌落數平均值乘以相應稀釋倍數計算出每克(毫升)樣品中平板菌落數。記錄時(shí),只有在換算到每克(毫升)樣品中平板菌落數時(shí),才能定下兩位有效數字,第三位數字采用四舍五入的方法記錄。也可將樣品的平板菌落數記錄為10的指數形式(見(jiàn)下表中的例子)。

 

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