中華人民共和國國家標準 食品衛生微生物學(xué)檢驗副溶血性弧菌檢驗

1、范圍本標準規定了副溶血性弧菌檢驗方法。本標準適用于動(dòng)物隆水產(chǎn)干制品、腌醉制生食動(dòng)物性水產(chǎn)品、即食藻類(lèi)食品、魚(yú)糜制品等水產(chǎn)食品和水產(chǎn)調味品以及食物中毒樣品中副溶血性弧菌的檢驗。2、規范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準．GB / T 4789 . 28一2。。3食品衛生微生物學(xué)檢驗染色法、培養基和試劑3、設備和材料3.1冰箱：O℃ ～4℃ 。3.2恒溫培養箱：36℃ 士1℃ 。3.3顯微鏡：lo*——100*。3.4均質(zhì)器或滅菌乳缽。3.5架盤(pán)藥物天平：0g——5009，精確至0.59。3.6滅菌試管：16mm*160mm，15mm*100mm及相應的試管架。3.7滅菌刻度吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、5ml、10mL（具0.1ml刻度）。3.8滅菌錐形瓶：500 mL、20ml。3.9滅菌玻璃珠：直徑約5mm。3.10滅菌培養皿：90 mm。3.11 1mL注射器。3.12接種燈和接種環(huán)．3.13滅菌手術(shù)剪、鑷子等。3.14小白鼠：12g一15g。4培養基和試劑4.1氯化鈉結晶紫增菌液：按GB/丁4789.28一2003中4.39規定。4.2氯化鈉蔗糖瓊脂：按GB/T 4789.28一2003中4.40規定。4.3嗜鹽菌選擇性瓊脂：按GB/T 4789.28一2003中4.41規定。4.4 3.5％氯化鈉三糖鐵瓊脂：按GB/T4了89.28一2003的中4.42規定。4.5氯化鈉血瓊脂：按GB/T 4789.28一2003中4.43規定。4.6嗜鹽性試驗培養基：按GB/T 4789.28一2003中4.44規定．4.7 3.5％氯化鈉生化試驗培養基：按GB/T 4789.28一2003中4.45規定。4.8革蘭氏染色液：按GB/T 4789.25一2003中2.2規定。4.9甲基紅試劑：按GB/T 4789.28一2003中3.4規定。
4.10靛基質(zhì)試劑：按GB/T 4789.28一2003中3.13規定。
4.1 IV一P試劑：按GB / T 4789 . 28一2003中3 . 4規定。
5、檢驗程序（略）
6、操作步驟6.1 分離培養：以無(wú)菌操作取檢樣25g( mL )，加225mL 3.5％滅菌鹽水，用均質(zhì)器打碎或用乳缽磨碎，接種氯化鈉瓊脂平板和嗜鹽菌選擇性瓊脂平板各一個(gè)，同時(shí)取10mL，加人100mL增菌液中，置37℃8h—16h培養后，涂上述平板進(jìn)行分離，于37℃ 18h～24h培養后取出觀(guān)察。6.2 挑取上述可疑菌落，轉種3.5％氯化鈉三糖鐵斜面，37℃、24h觀(guān)察結果。6.3 涂片鏡檢：將三糖鐵培養基反應可疑者（底層變黃葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，斜面不變乳糖蔗糖不分解，有動(dòng)力，不產(chǎn)生硫化氫）進(jìn)行涂片革蘭氏染色鏡檢形態(tài)6.4 嗜鹽性試驗：將上述可疑培養物分別接種于不同濃度的鹽膝水中，37℃ 24h培養后觀(guān)察生長(cháng)情況，在無(wú)鹽和10％以上鹽的陳水中不生長(cháng)，在7％鹽的煉水中生長(cháng)良好者進(jìn)行下列有關(guān)試驗。
6.5生化試驗：分別接種各類(lèi)生化培養基．置37℃ ，除V-P、靛基質(zhì)、甲基紅試驗培養48h后加試劑觀(guān)察外，其他均可在以h觀(guān)察。
表1副溶血性弧菌的生化學(xué)性狀
葡萄糖產(chǎn)酸＋      V-P —葡萄糖產(chǎn)氣＋   靛基質(zhì)—蔗糖一  賴(lài)氨酸 +乳糖一          鳥(niǎo)氨酸 +/—甘露純十    精氨酸 —硫化氫一  溶血 +/—甲基紅＋
注：+陽(yáng)性；一陰性；+／一多數陽(yáng)性，少數陰性。
7、動(dòng)物實(shí)驗 
   將上述各類(lèi)反應的副溶血性弧菌接種3.5%氯化鈉胨水，經(jīng)37℃16—18h培養后，小鼠腹腔注射0.3ml，觀(guān)察2—3d，將死亡小鼠進(jìn)行解剖并做分離培養。
    
   

 

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