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    人類(lèi)免疫缺陷病毒—微生物學(xué)檢查



    錄入時(shí)間:2008/12/10 15:31:49 來(lái)源:青島海博生物

       HIV感染早期呈病毒血癥時(shí),從病人血液、腦脊液和骨髓細胞中能分離到病毒,從血清中查到HIV抗原;在無(wú)癥狀的潛伏期內一般不能或很少從外周血中檢測到HIV抗原。當病人進(jìn)入 AIDS相關(guān)綜合征或典型AIDS期,于外周血中均可查到病毒抗原、核酸及抗體。檢測HIV感染者體液中病毒抗原和抗體的方法,操作方便,易于普及應用,其中抗體檢測尤普通。但HIV P24抗原和病毒基因的測定,在HIV感染檢測中的地位和重要性也日益受到重視。 
    (一)抗體檢測 
        抗體檢測主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和免疫熒光試驗(IFA)。ELISA用去污劑裂解HIV或感染細胞液提取物作抗原,IFA用感染細胞涂片作抗原進(jìn)行抗體檢測,由于HIV的全病毒抗原與其他反轉錄病毒有交叉反應,而且病毒是出芽釋放,病毒包膜中可能帶有細胞成分,與人血清中抗HLA也可發(fā)生交叉反應,易造成假陽(yáng)性,如果發(fā)現陽(yáng)性標本應重復一次。為防止假陽(yáng)性,這類(lèi)試驗用于篩查抗HIV抗體,陽(yáng)性者尚需進(jìn)一步做蛋白印跡法(WB)確證。 
       WB法是用聚丙烯酰胺凝膠電泳將HIV蛋白進(jìn)行分離,再經(jīng)轉移電泳將不同蛋白條帶轉移于硝酸纖維膜上,加入病人血清孵育后,用抗人球蛋白酶標抗體染色,就能測出針對不同結構蛋 白抗體,如抗gp120、gp41、P24抗體,特異性較高。 
    (二)抗原檢測 
        用ELISA檢測P24抗原,在HIV感染早期尚未出現抗體時(shí),血中就有該抗原存在。由于P24量太少,陽(yáng)性率通常較低,F有用解離免疫復合物法或濃縮P24抗原,來(lái)提高敏感性。 
    (三)核酸檢測 
        用PCR法檢測HIV基因,具有快速、高效、敏感和特異等優(yōu)點(diǎn),目前,該法已被應用于HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。 
    (四)病毒分離 
        常用正常人外周血液分離單個(gè)核細胞,加PHA刺激并培養3—4d后,接種病人血液的單個(gè)核細胞、骨髓細胞、血漿或腦脊液,2—3d后,觀(guān)察病毒生長(cháng)情況。如果出現CPE,特別是發(fā)現多核巨細胞,說(shuō)明有病毒增殖。采用IFA法檢測培養細胞中的HIV抗原,或用生化方法檢測培養液中的反轉錄酶活性,也可通過(guò)電鏡檢測HIV顆粒。   
       

     

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