外斐反應

【原理】某些變形桿菌菌株的菌體耐熱多糖與斑疹傷寒等立克次體有共同抗原成分，能與抗立克次體抗體發(fā)生交叉凝集反應，由于變形桿菌易于培養，因此用這些變形桿菌菌株的抗原代替立克次體抗原與患者血清做試管凝集反應，稱(chēng)外斐反應。用以檢查血清中有無(wú)相應的抗體，輔助診斷立克次體病。一般診斷普氏和斑疹傷寒立克次體時(shí)，變形桿菌菌體抗原OX2及OX19陽(yáng)性，診斷恙蟲(chóng)病立克次體則變形桿菌菌體抗原OXk陽(yáng)性。Q熱柯克斯體的外斐反應陰性，其血清學(xué)診斷常采用I和II兩相抗原進(jìn)行補體結合實(shí)驗。 
【材料】 
1、待檢患者血清。 
2、變形桿菌OXk、OX2及OX19診斷菌液。 
3、其他小試管、吸管、記號筆等。 
【方法】 
1、取3排小試管，每排9支并標號。 
2、取0.9%氯化鈉溶液2.7ml與被檢血清0.3ml于中試管內混勻，使之成1：10稀釋血清，于每排第1管內各加入0.5ml。 
3、將中試管內再補加0.9%氯化鈉溶液1.5ml，混勻后使之為1：20的稀釋血清，并加于每排第2管內，每管0.5ml。 
4、依次連續作倍比稀釋血清至各排第8管，第9管只加0.5ml0.9%氯化鈉溶液以作抗原對照。 
5、將OXk、OX2及OX19 3種診斷菌液（抗原），分別加入3排的9支試管內，每管0.5ml。加入菌液后各排第1管至第8管的血清最終稀釋度依次為1：20，1;40，1；80，1：160，1：320，1：640，1：1280，1：2560.
6、振搖30秒左右，于37℃孵育過(guò)夜，次日觀(guān)察結果。 
7、觀(guān)察凝集現象。注意觀(guān)察前不要晃動(dòng)試管，與對照管比較，判定凝集程度。 
【結果】 外斐反應的結果判斷同肥達反應，以凝集效價(jià)判斷之。此實(shí)驗所用抗原為O抗原，故陽(yáng)性凝集現象與傷寒沙門(mén)菌O抗原相似，即凝塊成顆粒狀。能使凝集呈“ + +”的血清最高稀釋度為本實(shí)驗的凝集效價(jià)。雙份血清效價(jià)4倍升高可作為新近感染立克次體的指標。單份血清凝集效價(jià)超過(guò)1：160時(shí)才有診斷意義。   
   

 

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