支原體的分離培養鑒定

   溶脲脲原體（Uu）和人型支原體（Mh）是常見(jiàn)的致病性泌尿道支原體。根據支原體不同生化反應特性和對特定物質(zhì)的不同抵抗力可用于分離鑒定支原體。 
【原理】標本分別接種于支原體鑒別培養液內。溶脲脲原體可產(chǎn)生脲酶，使分糖產(chǎn)氨，培養液呈堿性，指示劑由黃色變?yōu)榉奂t色。人型支原體能分解精氨酸產(chǎn)氮，使含有精氨酸肉湯培養液呈堿性而呈粉紅色。 
【材料】支原體分離鑒定培養液。 
【標本采集】標本采集后應立即送檢，室溫保存不超過(guò)2小時(shí)，2—8℃保存不超過(guò)5小時(shí)。 
男性：用男性無(wú)菌拭子插入尿道口內2—4cm處輕輕旋轉取分泌物；也可取前列腺液或精液培養。必要時(shí)也可用尿液作支原體培養，取清晨第1次尿的中段尿10—20ml，經(jīng)2000rpm離心10分鐘，取沉渣接種，但尿液支原體培養陽(yáng)性率明顯低于尿道分泌物。 
女性：用擴陰器擴陰后，用女性拭子在宮頸口內1—2cm處輕輕旋轉取宮頸分泌物；也可用羊水培養。不推薦用尿液。 
【培養】 
1、培養管復溫取出所需要數量的培養管，復溫至室溫，作好標記。 
2、接種將拭子插入培養管，旋轉并擠壓數次，使拭子中支原體滲入液體中，拭子經(jīng)滅菌處理后妥善處理；尿液沉渣、精液、羊水、前列腺液等液體標本取0.2ml接種培養液，充分混勻。 
3、培養35—37℃恒溫培養24—48h小時(shí)，觀(guān)察結果。 
【結果】 Uu應在24小時(shí)內報告，Mh應在48小時(shí)內報告，其他結果在48小時(shí)內報告，最長(cháng)不超過(guò)72小時(shí)。培養管液體由橙色變紅色，透明清亮，無(wú)明顯渾濁，表明有Uu和（或）Mh生長(cháng)，可判為陽(yáng)性；培養管液體無(wú)任何變化，可報陰性結果；培養液明顯渾濁變紅者，應判無(wú)支原體生長(cháng)。必要時(shí)可做支原體固體培養，低倍鏡下觀(guān)察有荷包蛋樣菌落生長(cháng)者為支原體陽(yáng)性。 
【注意事項】 
1、Uu 、Mh生長(cháng)應保持培養液透明清亮，無(wú)明顯渾濁，偶遇渾濁者不得報支原體陽(yáng)性。 
2、Uu生長(cháng)，培養液正常變色時(shí)間在24小時(shí)內，但如果標本含量少時(shí)，變色時(shí)間可能超過(guò)24小時(shí)。Mh生長(cháng)，培養液正常變色時(shí)間在24—48小時(shí)之內，如果標本含量較大時(shí)，變色時(shí)間可能會(huì )小于24小時(shí)。 
3、不能確定有無(wú)雜菌污染時(shí)，可將培養液取出少許接種于血平板或通過(guò)0.45um濾膜過(guò)濾培養，根據血平板菌落生長(cháng)或過(guò)濾后培養的顏色變化來(lái)判斷雜菌污染。    
   

 

上一篇：形態(tài)及菌落觀(guān)察

下一篇：肺炎支原體冷凝集實(shí)驗